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超高效液相色谱-质谱联用技术解析黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类天然产物结构超高效液相色谱-质谱联用技术解析黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类天然产物结构 束 彤1，丁丽娜2，王 茜1，贾彩惠1，邱亦亦2，阮 晖2,3,4,* （1.青海省食品检验检测院，青海 西宁 810008；2.浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江 杭州 310058；3.浙江省农产品加工技术研究重点实验室，浙江 杭州 310058；4.浙江大学宁波研究院，浙江 宁波 315100） 摘 要：以青海柴达木黑枸杞为研究材料，对其超临界CO2萃取物，采用超高效液相色谱-质谱联用技术和PeakView色谱工作站拟合进行分析，并通过二级质谱解析和紫外光谱及质谱数据比对，阐明其中的黄酮组分及其结构。共鉴定出黑果枸杞果的超临界CO2萃取物中含有13 种黄酮类化合物（7 种黄酮醇苷元及黄酮醇苷，3 种二氢黄酮醇苷元，2 种黄酮苷元和1 种二氢黄酮苷元），包括芦丁、槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷即槲皮素-3-O-吡喃半乳糖苷、二氢槲皮素、二氢异鼠李素、二氢山柰酚、槲皮素、芹菜素、橙皮素、苜蓿素、山柰酚、异鼠李素和山柰素，其中橙皮素和苜蓿素在黑果枸杞成分研究中未被发现过。 关键词： 黑果枸杞；黄酮；超临界CO2萃取物；超高效液相色谱-质谱联用 黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）具有抗氧化、抗疲劳、抗缺氧、辅助降血糖、降血脂、预防心血管疾病、免疫调节、抑菌等功效[1-4]。目前，对黑果枸杞所含天然产物的提取分离研究较多，例如采用超声-微波协同萃取法提取黑果枸杞多糖[5]，采用大孔树脂吸附、超声-微波协同、超声辅助双水相、亚临界水相等方法提取黑果枸杞色素、黄酮和花青素[6-11]，均获得了较理想的得率，并且得到的天然产物也适合进行微胶囊包埋[12]。对黑果枸杞所含天然产物定量分析方法包括高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法（定量测定黑果枸杞果实中花色苷）[13]、离子色谱法（定量测定黑果枸杞中甜菜碱）[14]、pH示差法（定量测定花青素）[15]等。对黑果枸杞所含天然产物的组分及其性质也进行了分析。王琪等[16]发现黑果枸杞干果和鲜果中多酚类物质种类多于红枸杞。李进等[17]发现黑果枸杞色素属于花色苷类，并研究了其在pH值、光、氧化剂、还原剂等因素下的稳定性。楼舒婷等[18]采用固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术相结合，从新疆枸杞、新疆黑果枸杞和青海黑果枸杞中共鉴定出50 种物质，包括酯类19 种、酮类6 种、烯类5 种、芳烃类4 种、烷烃类2 种、醛类8 种、醇类2 种、酸类3 种和醚类1 种。 女人从病历上看到这个女患者是白天送进来的，肾结石嘌呤代谢失常，已出现肾盂粘膜。女人禁不住火气上窜，问身后的那个实习护士病人怎么就无端的离开病房了呢？实习的女护士年纪很小，大概也就是个卫校毕业生，早已脸红心跳的低下头不说话。 从黑果枸杞所含天然产物中还分离鉴定出多种功效性物质，包括具有强抗氧化性和免疫调理能力的糖苷和多糖[20-24]，以及种类丰富的多酚。Chen Shasha等[25-26]采用超声辅助从黑枸杞中提取了具有良好抗氧化性的酚类物质，通过HPLC识别出绿原酸、二羟基桂皮酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸5 种物质，还发现黑枸杞中矮牵牛配基衍生物占97%的花青素具有抗氧化、神经损伤修复、改善记忆等功效。Tang Jilong等[27]通过柱层析纯化系统从黑枸杞中获得矮牵牛配基花青素，显示其具有抗氧化和保护PC12细胞（一种神经损伤细胞模型）功效。Tang Peipei等[28]还发现，黑枸杞色素中，矮牵牛配基-芸香葡萄糖苷是最主要的色调贡献物质，并可在宽泛pH值范围内给出丰富色调，具有作为天然食用色素的巨大潜力。 列车能量监控模型如图1所示[1]。图1中：ATP系统在D1位置触发了紧急制动，此时列车速度为v1；ATP系统认为在列车牵引失去作用之前，列车切除牵引的时间为(T2-T1)。ATP系统在D2位置时，牵引完全切除，此时列车速度为v2，列车的走行距离为(D2-D1)；ATP系统在T2时，列车牵引完全切除，但列车还需要一个响应时间才能施加紧急制动，在这段时间内列车既没有牵引也没有制动，完全依赖于列车所处的上坡或者下坡情况运行；ATP系统在T3时，列车紧急制动完全施加，此时列车速度为v3，列车所在的位置为D3。 综上所述，黑枸杞具有非常丰富的功效及相关活性成分，值得采用合适的分离制备与结构鉴定技术进行深入发掘。超临界CO2萃取技术具有低温提取、无有毒残溶和可以选择性分离等优点，特别适合分离提取微量及稳定性低的活性组分。目前解析黑枸杞超临界CO2萃取物中黄酮组分结构的研究鲜见报道。本研究采用超高效液相色谱-质谱（ultra-high performance liquid chromatographymass spectrometry，UPLC-MS）联用技术分析单体化合物的质谱裂解途径并进行结构解析，借助PeakView软件对质谱碎片给出候选分子式，再用Chemdraw软件推测拼接，推断出黄酮化合物的结构和裂解途径，全面解析青海柴达木地区黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类天然产物的组成和结构，为黑果枸杞的高值化加工利用提供基础性资料。 1 材料与方法1.1 材料与试剂黑果枸杞产于青海省柴达木地区。 乙醇（一级色谱纯） 天津四友精细化学品有限公司；所有黄酮类标准品（HPLC≥98%） 北京世纪奥科生物技术有限公司；所有分离用有机溶剂均为国产分析纯。 1.2 仪器与设备HGC-12A氮吹仪 天津恒奥科技发展有限公司；Centrifuge 5417R高速冷冻离心机 德国艾本德股份公司；SFE-2超临界CO2萃取仪 美国ASI公司；I-class UPLC仪 美国沃特世科技（上海）有限公司；Triple TOF 5600+型飞行时间质谱仪（配有可变波长紫外检测器和PeakView色谱工作站） 美国AB SCIEX公司。 1.3 方法1.3.1 样品溶液的制备 取适量黑果枸杞干果，置于烘箱中以55 ℃烘干，再用粉碎机粉碎至粒状，过40 目筛，得黑果枸杞粉末。取适量黑果枸杞粉，装入50 mL提取釜中，设置提取条件为萃取压力35 MPa、萃取温度45 ℃、提取时间1 h、出口阀温度110 ℃。待萃取完毕，再以无水乙醇为夹带剂，流速0.8 mL/min，按照相同的萃取条件，更换新的萃取瓶收集萃取液。待萃取完毕后，将萃取液溶解、浓缩、冷冻离心至合适浓度，过0.22 μm滤膜，待用。 1.3.2 对照品溶液的制备 分别称取槲皮素、二氢槲皮素、山柰酚、橙皮素、异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并配制成每个组分约0.05 mg/mL的混合对照品溶液，摇匀，过0.22 μm滤膜，备用。参考对照品的质谱裂解特征，解析黄酮类化合物的质谱裂解规律。 1.3.3 UPLC-MS方法 色谱条件：色谱柱为安捷伦ZORBAX-SBC18（100 mm×2.1 mm，3.5 μm）；以体积分数0.1%甲酸溶液为流动相A，以体积分数0.1%甲酸-乙腈为流动相B，线性梯度洗脱，系统程序：0～2 min、5% B，2～25 min、5%～50% B，25～33 min、50%～95% B；流速0.8 mL/min；柱温35 ℃；检测波长254 nm；进样量5 μL。 质谱条件：Triple-TOF 5600+飞行时间UPLC-MS仪，正负离子扫描模式；扫描范围，m/z 100～1 500；雾化气（GS1）55 psi；雾化气（GS2）55 psi；气帘气（CUR）35 psi；离子源温度600（正）～550 ℃（负）；离子源电压5 500（正）～4 500 V（负）；一级扫描，去簇电压100 V，聚焦电压10 V；二级扫描，使用TOF MS-Product Ion-IDA模式采集质谱数据，二级质谱中的诱导碰撞解离能量为20、40 V和60 V，进样前，用校正泵做质量轴校正，使质量轴误差小于2×10-6。 选择我院内科1-3月份住院病人有便秘症状患者随机选取60名,随机分为2组,年龄60-92岁,平均年龄78.9岁,其中男33例,女27例,随机分为2组,每组30例,2组患者(性别、年龄、病程等)资料比较差异无统计学意义,具有可比性。 1.4 数据统计与分析有关数据及图表均从测定仪器中自动生成。 2 结果与分析2.1 黑果枸杞超临界CO2萃取物中组分分离 图1 黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮的UPLC图（A）及总离子流图（B）
Fig. 1 UPLC-UV chromatograms (A) and total ion current chromatograms (B) of the supercritical CO2 extract of black Goji fruit
如图1所示，黑果枸杞的超临界CO2萃取物中的主要活性成分得到有效分离。黄酮类化合物在负离子模式下干扰较少，也易被离子化，碎片信息更为准确，故本研究在负离子模式下，采用电喷雾离子源串联质谱技术，根据二级质谱结果，解析化合物裂解途径，确定黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类成分的结构。 图8示出机组综合供电煤耗降低随负荷增加而单调增大，随空冷岛散热面积的增加而单调增大。机组为设计散热面积时，综合供电煤耗为343.3 g/kWh。在散热面积分别增加16.7%、33.3%、50%、66.7%时，机组综合供电煤耗降低Δbg分别为4.4、7.5、9.7和11.4 g/kWh。随散热面积增加，综合供电煤耗降低Δbg的等差差值分别为4.4、3.1、2.2和1.7 g/kWh。表明随散热面积均匀增加，机组综合供电煤耗降低的边际效应逐渐变弱。 2.2 黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类化合物的识别与结构鉴定采用PeakView软件对质谱碎片给出候选分子式，再用Chemdraw软件推测拼接，推断黄酮化合物的裂解途径，以及与标准品比对出峰时间（如果有匹配标准品），确定黄酮化合物的结构。 （二）重叙述，轻冲突。实验教学中，教师常用的演示实验做法就是，自己一边操作，一边讲解步骤和要领，但是这个过程，一直保持着同一个教学节奏，平铺直叙，既缺少实验情境的创设，又缺少与学生之间的互动，没有认知冲突的出现，很难激发学生的学习和探知欲望。 为方便讨论黄酮苷元及糖苷质谱断裂形成的碎片离子，本研究对黄酮类化合物裂解后的特征碎片离子进行了系统命名。如图2所示，其中，对黄酮苷元，i,jA和i,jB分别表示该黄酮苷元的碎片包含A-环和B-环，上标i和j显示了C环上键的断裂位置。对黄酮苷，k,lXj表示该碎片依然包括了黄酮苷元，下标j表示第j个糖基上键的断裂（从黄酮苷元数起），上标k和l显示了糖基环断裂的位置。  图2 本研究中裂解途径所产生碎片的系统命名
Fig. 2 Nomenclatures adopted for various retrocyclization fragments observed in this study
共鉴定出13 种黄酮类化合物，按其结构类型可分为4 类，其中包括7 种黄酮醇苷元及黄酮醇苷，3 种二氢黄酮醇苷元，2 种黄酮苷元和1 种二氢黄酮苷元，结果见表1。 表1 黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类化合物的鉴定结果
Table 1 Main flavonoids identified in the supercritical CO2 extract  注：*.具有标准品。 编号 保留时间/min化合物名称 化学式 m/z 误差（×10-6）主要的二级离子m/z理论值 测量值主要的一级离子m/z 11* 10.95 芦丁 C27H30O16 609.146 1 609.145 8 -0.5 609.15 300.03, 179.00 12 11.38 槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷 C21H18O13 477.067 5 477.066 7 -1.6 477.07 301.03, 151.00 13 11.44 金丝桃苷 C21H20O12 463.088 2 463.087 1 -2.5 463.09 300.04, 271.02 14* 11.76 二氢槲皮素 C15H12O7 303.051 0 303.052 7 5.6 303.18 285.04, 125.02 15 14.06 二氢异鼠李素 C16H14O7 317.066 7 317.066 4 -1 317.07 289.07, 125.03 16 15.89 二氢山柰酚 C15H12O6 287.056 1 287.056 0 -0.4 287.06 151.00, 135.04 17* 16.35 槲皮素 C15H10O7 301.071 8 301.071 3 -0.6 301.2 201.11, 183.10 18* 18.35 芹菜素 C15H10O5 269.045 6 269.045 6 0.1 269.04 225.07, 121.03 19* 18.7 橙皮素 C16H14O6 301.071 8 301.071 3 -1.6 301.07 151.01, 134.04 20 18.77 苜蓿素 C17H14O7 329.066 7 329.066 7 0.1 329.23 299.02, 183.14 21* 18.83 山柰酚 C15H10O6 285.040 5 285.045 6 -0.8 285.04 239.03, 227.03 22* 19.28 异鼠李素 C16H12O7 315.051 0 315.050 8 -0.9 315.05 300.03, 271.03 23* 24.6 山柰素 C16H12O6 299.056 1 299.056 2 0.2 299.06 284.03, 151.00
2.2.1 黄酮醇及其苷类 化合物11、12、13、17、21、22、23推测皆为黄酮醇及其苷类。 综合考虑项目需求及不同储能技术性能，采用铅碳电池储能技术，建设规模容量250kW/1.2MWh。储能系统由铅碳蓄电池单元、储能变流器（PCS）、电池管理系统（BMS）、电池监控系统和预装式集装箱组成，项目采用“削峰填谷”运行方式，储能系统采用1个40呎标准集装箱，占地约30平方米。储能系统通过配电柜备用抽屉接入400V低压母线。详见图2所示。 化合物11通过和芦丁标品出峰时间以及二级质谱比对，确认为芦丁，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，为C27H30O16，相对分子质量610。在负离子模式下，芦丁产生分子离子峰m/z 609[M-H]-，m/z 609丢失一分子C10H18O8生成碎片m/z 343，m/z 609丢失C3上所连的糖苷即C12H20O9，得到m/z 301，再通过连续丢失1 个H和一分子CHO得到碎片m/z 300和m/z 271，最后丢失一分子C5O2生成碎片m/z 179。 化合物12经推断为槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，为C21H18O13，相对分子质量为478。在负离子模式下，除了产生分子离子峰m/z 477外，还通过丢失葡萄糖醛酸苷得到碎片m/z 301，而碎片301则通过狄尔斯-阿尔德以应（Retro Diels-Alder reaction，RDA）发生1,4B断裂和RDA 1,3A断裂生成碎片m/z 179和碎片m/z 151，还可以通过丢失一分子CH2O2生成碎片m/z 255。二级质谱中的碎片皆可由槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷通过相应的键断裂而得，并且槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷出峰时间和特征碎片一致。因此，化合物12推测为槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷。 化合物13经推断为金丝桃苷，即槲皮素-3-O-吡喃半乳糖苷，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，为C21H20O12，相对分子质量为464。在负离子模式下，除了产生分子离子峰m/z 463外，还通过丢失吡喃半乳糖苷得到碎片m/z 301，碎片m/z 301通过连续丢失1 个H和一分子CHO得到碎片m/z 300和m/z 271，而m/z 271分别丢失1 个O和一分子CO生成碎片m/z 255和碎片m/z 243。二级质谱中的碎片皆可由金丝桃苷通过相应的键断裂而得，并且和金丝桃苷出峰时间和特征碎片一致。因此，化合物13推测为金丝桃苷。 化合物17通过与槲皮素标品的出峰时间和二级质谱对比，可确定为槲皮素，其分子式为C15H10O7，相对分子质量为302。除了产生分子离子峰m/z 301外，二级质谱上主要的碎片有m/z 201、183等。这也跟其他农产品中的槲皮素相关信息一致。 化合物21通过与山柰酚标品的出峰时间和二级质谱对比，可确定为山柰酚，其分子式为C15H10O6，相对分子质量为286。山柰酚二级碎片较少，主要为m/z 268、239、187，m/z 268和m/z 239分别由m/z 285丢失一分子OH和一分子CH2O2得到，而m/z 187则是由碎片m/z 239丢失一分子C3O得到。 化合物22通过与异鼠李素标品出峰时间和二级质谱的对比，可确定为异鼠李素，其分子式为C16H12O7，相对分子质量为316。在负离子模式下，除了产生分子离子峰m/z 315外，还通过丢失一分子CH3生成典型二级碎片m/z 300，再通过断裂相应的键得到碎片m/z 243、227、151等。 柴婷，女，满族，1987年12月，河南省洛阳市，山东理工大学工商管理专业研究生，现任职于山东现代学院。 化合物23通过与山柰素标品的出峰时间和二级质谱的对比，可确定为山柰素，其分子式为C16H12O6，相对分子质量为300。在负离子模式下，产生分子离子峰m/z 299，还通过丢失一分子CH3生成典型二级碎片m/z 284，再通过断裂相应的键得到碎片m/z 255、227、164、151等。 2.2.2 二氢黄酮醇及其苷类 化合物14、15、16皆为二氢黄酮醇苷元。 数学结构的发现便于我们高效解决一些数学问题，对于化简繁杂数学知识，内化数学方法有着重大的指导意义。通过观察、归纳、总结，发现数学结构的特点，进而发现数学中的知识间的韵律及统一，是一种美的享受。 化合物14为二氢槲皮素，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，为C15H12O7，相对分子质量为304。其裂解途径如下：分子离子峰m/z 303失去1 个H2O生成m/z 285；m/z 303失去1分子C3H2O3生成碎片m/z 217；m/z 217失去1 个H2O生成m/z 199，或丢失一分子C2H4O4生成m/z 125。二级质谱中的碎片皆可由二氢槲皮素通过相应的键断裂而得，并且和之前报道的沙棘中的二氢槲皮素的出峰时间和特征碎片一致。因此，化合物14推测为二氢槲皮素。 化合物15为二氢异鼠李素，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，其分子式为C16H14O7，相对分子质量为318。其裂解规律具体如下：分子离子峰m/z 317失去1 个CO生成m/z 289，而m/z 289可以通过丢失C4H2O2生成m/z 207，再丢失1 个CO生成m/z 179，或是m/z 179丢失CH2O生成m/z 149，或是丢失C2H2O生成m/z 137；m/z 317失去1 个CO2生成m/z 273，再连续丢失一分子C2H2O、C2H7O3生成碎片m/z 231、152；碎片m/z 273也可通过丢失一分子CH3生成m/z 258，再分别丢失一分子CO和C8H5O2生成碎片m/z 230、125，而碎片m/z 230通过丢失一分子C2H2O得到m/z 188。二级质谱中的碎片皆可由二氢异鼠李素通过相应的键断裂而得，并且和之前报道的沙棘中二氢异鼠李素的出峰时间和特征碎片一致。因此，化合物15推测为二氢异鼠李素。 化合物16为二氢山柰酚，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，为C15H12O6，相对分子质量为287。二氢山柰酚的二级碎片较少，除了分子离子峰m/z 287外，还产生几个比较典型的二级碎片离子，如经RDA断裂生成m/z 151（1,3A），碎片m/z 151再分别丢失一分子H2O和1 个O生成碎片m/z 133和m/z 135，碎片m/z133通过丢失一分子C3O2得到碎片m/z 65，碎片m/z 135丢失一分子CO生成碎片m/z 107。二级质谱中的碎片皆可由二氢山柰酚通过相应的键断裂而得，并且和之前报道的沙棘中的二氢山柰酚的出峰时间和特征碎片一致。因此，化合物16推测为二氢山柰酚。 第二种，消灭人类。但是，这种情况可能不会发生，因为对于具有无限智力且有情感能力的超人来说，人类既不能给它带来好处，也不会给它带来坏处，消灭人类有什么意义呢?所以，还存在第三种可能。 2.2.3 黄酮苷元及其苷类 化合物18、20为黄酮苷元。 化合物1 8通过与芹菜素标品的出峰时间和二级质谱的对比，可确定为芹菜素，其分子式为C15H10O5，相对分子质量为270。在负离子模式下，除了产生分子离子峰m/z 269外，还通过丢失一分子CO2生成碎片m/z 225，丢失一分子H2O生成碎片m/z 149，或通过其他断裂方式生成碎片m/z 121、117。 化合物20经推测为苜蓿素，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，为C17H14O7，相对分子质量为330。在负离子模式下，除了产生分子离子峰m/z 329外，再通过丢失一分子C6H8O3生成碎片m/z 201，再丢失一分子H2O生成碎片m/z 183，或分子离子峰直接丢失一分子H2O生成碎片m/z 311。以上之外，m/z 329通过连续丢失一分子CH3得到碎片m/z 314和m/z 299，m/z 299又连续丢失CO和C5H2O4得到碎片m/z 271、145。二级质谱中的碎片皆可由苜蓿素通过相应的键断裂而得，因此，化合物20推测为苜蓿素。 3) 不同浓度药剂的制备。试验设5个浓度梯度，90%阿维菌素原粉和25%甲胺基阿维菌素苯甲酸盐母液的配制浓度分别为25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L和400 mg/L；81.7%噻唑膦原油的配制成浓度分别为10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L和160 mg/L，以加等量无菌水为对照(CK)，3次重复。 2.2.4 二氢黄酮苷元 化合物19通过与橙皮素标品的出峰时间和二级质谱的对比，可确定为成橙皮素，其分子式经PeakView色谱工作站模拟，为C16H14O6，相对分子质量为302。在负离子模式下，除了产生分子离子峰m/z 301外，还通过丢失一分子CH3生成碎片m/z 286，发生RDA以应生成碎片151（1,3A）和碎片149（1,3B）；还通过其他断裂方式生成碎片m/z 201、107等。 2.3 化合物结构图及相关裂解途径以下是部分代表性化合物（化合物15和19）的二级质谱图和所推断的裂解途径（图3、4），以及采用PeakView和Chemdraw软件所绘出的黄酮化合物结构（图5）。  图3 化合物15二氢异鼠李素的裂解途径
Fig. 3 Fragmentation pathway of dihydroisorhamnetin
 图4 化合物19橙皮素的裂解途径
Fig. 4 Fragmentation pathway of hesperetin
 图5 黑枸杞超临界CO2萃取物中黄酮化合物的化学结构式
Fig. 5 Chemical structures of flavonoids identified in the supercritical CO2 extract
3 讨论与结论多酚（包括黄酮）是黑果枸杞所含天然产物中最重要的一类。Zheng Jie等[29]在黑果枸杞甲醇提取物中识别出11 种花青素：矮牵牛素-3-O-半乳糖苷-5-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷、飞燕草素-3-O-芸香糖苷、(顺式对香豆酰基)-5-O-葡糖苷、飞燕草素-3-O-芸香糖苷(以式对香豆酰基)-5-O-葡糖苷、矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(咖啡酰基)-5-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(顺式对香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(以式对香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷(苹果酰基)-5-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷(阿魏酰基)-5-O-葡萄糖苷、锦葵素-3-O-芸香糖苷(顺式对香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷；Tian Zhihao等[30]在黑果枸杞中识别出9 种花青素：天竺葵素-3-O-半乳糖苷、天竺葵素-3-O-二葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3,5-O-二葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-(6-对香豆酰基)-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(以式-对香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷和矮牵牛素-3-O-芸香糖苷(以式-对香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷；有研究者[31-32]在黑果枸杞乙醇提取物中识别出18 种多酚，包括2 种黄酮（儿茶素和柚皮素），7 种酚酸（没食子酸、香草酸、2,4-二羟基苯甲酸、藜芦酸、苯甲酸、鞣花酸和水杨酸），并且根皮素与原儿茶酸也被准确测定，还在黑果枸杞中识别10 种花青素组分（飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-葡萄糖苷、芍药素-3-葡萄糖苷、锦葵素-3-葡萄糖苷、飞燕草素、矢车菊素、矮牵牛素、天竺葵素和锦葵素），其中矮牵牛素-3-葡萄糖苷占比最大，并发现黑果枸杞花青素提取物和矮牵牛素-3-葡萄糖苷在谷氨酸钠诱导的大鼠痛风中发挥抗炎作用。在化学物数据库Reaxys（ https://www.reaxys.com）中，目前仅收录4 种黑枸杞黄酮，即胡椒皮黄酮、山柰酚、山柰酚（芸香苷）、二羟基桂皮酸。 本研究在黑果枸杞超临界CO2萃取物中共识别出13 种黄酮化合物（7 种黄酮醇苷元及黄酮醇苷、3 种二氢黄酮醇苷元及黄酮醇苷、2 种黄酮苷元及黄酮苷和1 种二氢黄酮醇苷元，包括芦丁、槲皮素-3-β-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷即槲皮素-3-O-吡喃半乳糖苷、二氢槲皮素、二氢异鼠李素、二氢山柰酚、槲皮素、芹菜素、橙皮素、苜蓿素、山柰酚、异鼠李素、山柰素），与以往研究相比，组分谱有一定差异，特别是橙皮素和苜蓿素之前在之前对黑果枸杞的研究中还未被发现过。本实验对黑果枸杞超临界CO2萃取物中的黄酮类化合物进行较全面地分析，综合以往研究中采用其他提取媒介和分析手段所得出的研究结果，可以更加全面地诠释黑果枸杞中的黄酮组分与结构。 参考文献： [1] 张晶, 杨慧海, 刘芳芳, 等. 黑果枸杞的化学成分药理作用及栽培技术的研究现状[J]. 食品与生物技术学报, 2018, 37(7): 673-678.DOI:10.3969/j.issn.1673-1689.2018.07.001. 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Structural Elucidation of Flavonoids in the Supercritical CO2 Extract of Black Goji Fruit by Using Ultra-high Performance Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry SHU Tong1, DING Lina2, WANG Qian1, JIA Caihui1, QIU Yiyi2, RUAN Hui2,3,4,*
(1. Qinghai Institute for Food Control, Xining 810008, China; 2. College of Biosystems Engineering & Food Science, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China; 3. Zhejiang Key Laboratory for Agro-food Processing, Hangzhou 310058, China;4. Ningbo Research Institute, Zhejiang University, Ningbo 315100, China) Abstract: The flavonoid components of the supercritical CO2 extract of black Goji berries from Qaidam, Qinghai were analyzed by ultra-high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS)employing PeakView workstation, and their structures were determined by analysis of the tandem mass spectra, ultraviolet(UV) spectroscopic analysis and comparison of the mass spectral data with the reference standards. As a result, a total of 13 fl avonoids were identified, including 7 fl avonol aglycones and fl avonol glycosides, 3 dihydroflavonol aglycones, 2 fl avonoid aglycones and 1 dihydrogen, namely rutin, quercetin-3-β-glucuronide, hyperoside, quercetin-3-O-galactopyranoside,dihydroquercetin, dihydroiso rhamnosin, dihydrokaempferol, quercetin, apigenin, hesperetin, alizarin, kaempferol,isorhamnetin, and kaempferol. It is noteworthy that hesperetin and alizarin were found in black Goji for the fi rst time. Keywords: black Goji; fl avonoid; supercritical CO2 extract; ultra-high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry
收稿日期：2019-05-05 基金项目：浙江省科技计划项目（2017C26004）；青海省科技计划项目（2017-ZJ-Y06）；西宁市科技计划项目（2019-Y-09）第一作者简介：束彤（1966—）（ORCID: 0000-0002-8839-3253），男，高级工程师，学士，研究方向为食品检验检测。E-mail: shutong631066@163.comDOI:10.7506/spkx1002-6630-20190505-033 中图分类号：TS201.2 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2020）10-0206-07 引文格式： 束彤, 丁丽娜, 王茜, 等. 超高效液相色谱-质谱联用技术解析黑果枸杞超临界CO2萃取物中黄酮类天然产物结构[J].食品科学, 2020, 41(10): 206-212. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20190505-033. http://www.spkx.net.cn如何能够增强员工对组织的认同，更加信赖和依靠组织，使员工心甘情愿的为组织贡献自己的才智，能站在组织发展的角度和层面来思考问题，是企业需要解决的一个重要问题。 SHU Tong, DING Lina, WANG Qian, et al. Structural elucidation of flavonoids in the supercritical CO2 extract of black Goji fruit by using ultra-high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry[J]. Food Science, 2020, 41(10):206-212. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20190505-033. http://www.spkx.net.cn
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发表于 2021-2-10 10:51:17
