QuEChERS-HPLC-MS/MS法同时测定水果中38 种农药的残留量

奥鹏网院作业

QuEChERS-HPLC-MS/MS法同时测定水果中38 种农药的残留量QuEChERS-HPLC-MS/MS法同时测定水果中38 种农药的残留量

梁秀美1，张维一1，张 微2，谢拾冰1，何如意1，徐 静1，苏来金1，孙博伦3，张 井1,*

（1.温州市农业科学研究院，农业农村部农产品质量安全风险评估实验站，温州市特色食品资源工程技术研究中心，浙江 温州 325006；2.舟山市食品药品检验检测研究院，浙江 舟山 316000；3.宁波大学食品与药学学院，浙江 宁波 315000）

摘 要：建立水果中38 种农药残留量的测定方法。样品经粉碎后，用1%甲酸-乙腈溶液快速提取，无水硫酸镁除水后，经C18、N-丙基乙二胺和硅藻土填料净化，用高效液相色谱-串联质谱仪分析。采用Accucore aQ柱进行分离，电喷雾正离子多反应监测模式检测，外标法定量。经方法验证，38 种农药的方法检出限在0.3～26.2 µg/kg之间，定量限在0.6～52.4 µg/kg之间，线性相关系数（R）在0.999 5～0.999 9之间；本方法选择3 个浓度水平进行添加回收实验（n=6），平均加标回收率在70.1%～119.3%之间，相对标准偏差在2.7%～12.4%之间。该方法前处理快速、灵敏、准确，可为水果中农药的监管提供技术支持。

关键词：水果；QuEChERS；高效液相色谱-串联质谱；农药残留

水果农药残留量作为重要安全指标，直接关系到食品安全问题。GB 2763—2019《食品中农药最大残留限量》对水果等农产品提出了更严格的残留限量要求。因此，农业高质量发展的新时代对水果中农药残留的检测工作也越来越重视[1]。农药残留分析是一项对复杂混合物中痕量组分进行分析的技术，它通常包括样品前处理和检测两部分。目前常见的样品前处理新技术有加速溶剂萃取法[2-3]、微波萃取法[2,4]、固相微萃取[2,5-6]、分子印迹萃取技术[2,7-9]、QuEChERS法[2,10-13,14-18]等。水果中常用的分析技术有高效液相色谱法[16]、气相色谱法[17]、液相色谱-串联质谱法[12,14,18-20]、气相色谱-串联质谱法[12-15,21-23]。多数有机氯、有机磷及拟除虫菊酯类农药挥发性强，容易加热气化，因此用气相色谱或气相色谱-质谱联用法能取得较好的分析效果。但氨基甲酸酯类、苯甲酰脲类以及一些苯并咪唑类农药极性强、热稳定性差，加热易分解，使液相色谱法和液相色谱-质谱法成为首选的分析方法。由于液相色谱-质谱法能同时进行定性和定量分析，因此多用于农药残留分析中。根据浙江省特色农产品安全风险管控（一品一策）2016—2018年的数据，杨梅整个生产过程中常用农药有50多种，草莓有60余种，但其实际登记的数量仅分别为5 种和14 种；且草莓中检出率比较高的农药有嘧霉胺、多菌灵、啶虫脒、氯虫苯甲酰胺、吡虫啉、吡唑醚菌酯、啶酰菌胺等。而近几年本单位风险摸排中发现水果检出较多的农药有嘧菌酯、啶虫脒、吡虫啉、甲萘威、甲维盐、嘧霉胺、噻虫嗪、吡唑醚菌酯、螺螨酯、丙环唑、氯唑磷、虫酰肼、啶氧菌酯等。本研究拟在充分调研果农目前普遍在用农药的基础上，结合国家明文规定的禁限用农药清单、浙江省果蔬例行监测参数和浙江省特色农产品安全风险管控（一品一策）相关检测数据结果，通过优化前处理方法和测定条件，建立水果中38 种农药多残留的QuEChERS结合高效液相色谱-串联质谱检测方法。

1 材料与方法1.1 材料与试剂

氯苯嘧啶醇、呋虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、吡虫啉、3-羟基克百威、啶虫脒、噻虫啉、克百威、甲萘威、甲霜灵、氯吡脲、氯虫苯甲酰胺、嘧菌酯、氯嘧磺隆、多效唑、戊炔草胺、三唑酮、嘧霉胺、腈菌唑、氯唑磷、氟环唑、啶氧菌酯、虫酰肼、丙环唑、吡唑醚菌酯、辛硫磷、茚虫威、烯唑醇、多杀菌素、肟菌酯、硫线磷、唑虫酰胺、甲维盐、唑螨酯、螺螨酯、氟啶脲、哒螨灵（均为液态标准物质，质量浓度均为100 μg/mL）农业部环境保护科研监测所。

C18（40～63 μm）、N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）（40～63 μm）、石墨化炭黑（graphitized carbon black，GCB）（120～400 目）、酸性氧化铝（7G010005）、碱性氧化铝（AG010005）、硅藻土（545） 德国CNW公司；弗罗里硅土（0.150～0.250 mm） 美国WZ.der.Floridin公司；超纯硅胶（60～200 μm） 加拿大Silicycle公司；无水硫酸镁（分析纯） 西陇化工股份有限公司；甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯（均为色谱纯）德国默克公司；0.22 µm滤膜、1 mL注射器、2 mL样品瓶上海安谱实验科技股份有限公司；超纯水由Milli-Q Direct 8超纯水仪制备。

1.2 仪器与设备

TSQ QUANTUM ACCESS MAX液相色谱-质谱联用仪 美国热电公司；MS7610-33旋涡振荡器 美国Thermo Fisher公司；TG16-WS离心机 上海卢湘仪离心机仪器有限公司；ROTINA 380离心机 德国海蒂诗公司；AR1502CN电子天平 奥豪斯仪器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 样品前处理

准确称取10.00 g样品于50 mL离心管中，加入10.00 mL 1%甲酸-乙腈，混匀后再加入2.5 g无水硫酸镁，涡旋1 min后6 000 r/min离心5 min。取1.5 mL上清液于2 mL离心管，加入100 mg无水硫酸镁、50 mg C18、50 mg PSA、50 mg硅藻土，涡旋30 s后10 000 r/min离心10 min，过0.22 µm滤膜，待测。

1.3.2 标准溶液的配制

标准物混合中间液1（1 μg/mL）：准确移取38 种农药标准物质各0.100 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至10.0 mL，于4 ℃冰箱冷藏保存。

秀容月明又是一惊，这怎么可能？但细细想来，娘说的未尝没有道理。记得第一次见到乔瞧，他被淋了一身的水，越秀把手帕递给自己，含羞带笑；去年他发烧，乔瞧把药送来，正巧外面有人牵着狗带着网来捕黄鼠狼，她想去看热闹，就对越秀说“你来替我喂药”，说完就走了，越秀留下来，忙了半天，昏昏沉沉中，他发现越秀在凝视自己，那眼神，充满了关切和怜爱……难道她真的喜欢自己？

标准物混合中间液2（3.8 μg/mL，以噻虫嗪计）：按38 种农药标准物质仪器定量限比例，分别移取一定体积的农药标准物质于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至10.0 mL，于4 ℃冰箱冷藏保存。

基质混合标准溶液1：临用时用1%甲酸-乙腈溶液溶解的样品空白基质提取液稀释标准物混合中间液1，稀释成1、2、5、10、20、50 μg/L系列质量浓度的标准混合工作溶液，用于确定仪器检出限、定量限。

基质混合标准溶液2：临用时用1%甲酸-乙腈溶液溶解的样品空白基质提取液稀释标准物混合中间液2，稀释成20、40、100、200、400、1 000 μg/L（以噻虫嗪计）系列质量浓度的标准混合工作溶液，用于确定方法的线性范围、准确度和精密度。

1.3.3 仪器条件

1.3.3.1 高效液相色谱条件

Accucore aQ色谱柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm）；进样量10 µL，流速0.3 mL/min；柱温35 ℃；流动相A为0.1%甲酸溶液（内含0.1 g/L甲酸铵），流动相B为乙腈；梯度洗脱程序见表1。

表 1 高效液相色谱梯度洗脱程序
Table 1 Gradient elution program for HPLC

     

时间/min 流速/（mL/min） 体积分数/%A 0.1%甲酸溶液 B乙腈0.0 0.3 95 5 1.0 0.3 95 5 10.0 0.3 5 95 13.0 0.3 5 95 13.1 0.3 95 5 15.0 0.3 95 5

1.3.3.2 串联质谱分析条件

电喷雾离子源，正离子扫描模式；离子源温度350 ℃；喷雾电压3 500 V；毛细管温度300 ℃；鞘气压力（氮气）35 Arb；离子源电流4.0 μA；辅助气压力10 Arb；数据采集采用多反应监测模式。

2 结果与分析2.1 质谱条件的优化

优化锥孔气流、毛细管电压等仪器条件设置，筛选高响应特异离子对等质谱条件，采用正离子扫描反应监测模式的方式一针进样完成对所有目标物的检测。具体结果见表2。

表 2 38 种农药的质谱参数
Table 2 Mass spectrometric parameters for 38 pesticides

     

碰撞能量/V氯苯嘧啶醇 9.78 331.0/138.9 331.0/268.1 86 37/21呋虫胺 4.36 203.0/129.0 203.0/114.1 56 12/14噻虫嗪 5.36 292.0/181.0 292.0/211.0 79 21/11噻虫胺 6.02 249.9/131.8 249.9/93.0 50 13/45吡虫啉 6.11 256.0/175.1 256.0/209.0 67 19/16 3-羟基克百威 6.24 238.0/163.1 238.0/181.0 74 14/10啶虫脒 6.64 223.0/90.1 223.0/126.0 83 33/20噻虫啉 7.08 253.2/90.1 253.2/126.0 75 34/21克百威 7.87 222.1/123.1 222.1/165.1 71 20/11甲萘威 8.27 202.1/127.1 202.1/145.1 65 27/10分析物 保留时间/min定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）锥孔电压/V

续表2

     

分析物 保留时间/min定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）锥孔电压/V碰撞能量/V甲霜灵 8.76 280.2/192.1 280.2/220.1 48 17/13氯吡脲 8.84 248.0/93.0 248.0/129.0 58 33/18氯虫苯甲酰胺 8.90 483.8/176.8、483.8/285.6 483.8/452.7 73 43/17嘧菌酯 9.17 404.0/344.8 404.0/372.1 72 22/12氯嘧磺隆 9.42 415.0/120.9 415.0/186.1 0 37/19多效唑 9.41 294.0/70.1 294.0/124.9 60 19/32戊炔草胺 9.44 256.0/173.0 256.0/189.8 47 21/12三唑酮 9.41 294.1/69.3 294.0/197.0 54 20/14嘧霉胺 9.51 200.1/183.0 200.1/107.0 85 22/24腈菌唑 9.60 289.0/125.0 289.0/70.2 60 32/20氯唑磷 9.62 314.0/162.1 314.0/120.0 71 14/27氟环唑 9.95 329.9/122.9 329.9/120.9 76 17/20啶氧菌酯 9.99 368.0/115.4、368.0/145.9 368.0/144.9 40 44/19虫酰肼 9.97 353.1/105.3、353.1/297.3 353.1/133.1 64 39/16丙环唑 10.42 342.0/69.0 342.0/159.0 70 26/46吡唑醚菌酯 10.37 387.9/105.2 388.0/163.3 48 35/20辛硫磷 10.40 299.0/129.1 299.0/77.2 77 9/31茚虫威 10.53 528.0/293.0 528.0/203.0 75 12/35烯唑醇 10.56 326.1/159.0 326.1/70.0 87 30/27多杀菌素 10.54 732.4/142.2 732.4/98.1 105 28/40肟菌酯 10.59 409.1/144.9 409.1/185.9 17 39/19硫线磷 10.64 271.0/96.9 271.0/158.9 55 35/14唑虫酰胺 11.06 384.1/154.0、384.1/169.0 384.1/196.8 88 37/24甲维盐 11.10 886.4/126.0 886.4/158.0 113 34/34唑螨酯 11.53 422.2/214.8 422.2/365.8 77 24/14螺螨酯 11.46 411.1/71.3、411.1/72.3 411.1/313.9 0 15/12氟啶脲 11.47 539.9/347.0 539.9/383.0 102 44/17哒螨灵 11.71 365.1/309.0 365.1/147.1 75 10/23

2.2 样品前处理方法的优化

2.2.1 提取

1)计算机图像坐标系：在计算机视觉中，摄像机感光元件获得的像素信息经过处理后都由数组中的一个元素代替，每一个元素的值即代表了该像素点的值。2)成像平面坐标系：成像平面坐标系与计算机图像坐标系的不同在于其以图象的O1为原点，其中O1点一般与计算机图像平面的中心点相对应。3)摄像机坐标系：摄像机坐标系是基于摄像机、关于空间位置的三维坐标系，坐标系原点是摄像机镜头的光心，摄像机的主光轴为坐标系 Z 轴，X、Y 轴构成的平面平行则与像平面平行。4)世界坐标系：世界坐标系则是反应物体在真实三维空间中位置的坐标系，其以空间中任意一点为坐标系原点。[2]

其实没什么好看的，但方玫却把那个夜晚牢牢地记在了心底，那些风，那些灯，还有，那个人。自那以后，两人间就有些说不清道不明的感觉。

表 3 不同提取方法的38 种农药总体回收率
Table 3 Effect of different extraction methods on recoveries of 38 pesticides

     

提取方法 回收率/%中值 最小值 最大值 均值甲醇 75.8 48.6 98.4 74.1乙腈 88.4 68.0 108.3 86.5丙酮 89.3 66.9 110.9 87.6二氯甲烷 54.6 26.9 74.3 52.9乙酸乙酯 77.8 48.0 92.0 71.3乙腈＋无水硫酸镁 91.3 86.4 110.8 94.8 1%甲酸乙腈＋无水硫酸镁 92.1 89.8 109.3 96.0

选择瓯柑为实验对象，通过添加回收，考察不同试剂的提取效率。具体过程如下：称取10.00 g匀浆样品（每个处理3 个平行），添加标准物，静置30 min后加入10.00 mL提取试剂，涡旋1 min，6 000 r/min离心5 min，取上清液，过0.22 µm滤膜检测，通过计算38 种农药的回收率考察提取效果。

首先考察甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯5 种试剂的提取能力，实验结果显示乙腈、丙酮的提取效率较其他溶剂好（表3）。但用丙酮提取的样品色素较多，颜色较深，对仪器有损害，故初步选择乙腈为提取溶剂。考虑水果中水分的存在对乙腈的提取有一定影响，本实验选择在提取时加入2.5 g无水硫酸镁除水。有研究表明，在提取液中加入一些缓冲剂如甲酸，对维持溶液的pH值，降低敏感性药物的降解有良好的作用[24-26]，故本研究考察加入1%甲酸溶液对于提取效率的影响，结果显示去除水分能明显改善有机溶剂对目标物的总体提取效果，且乙腈中加入1%甲酸溶液能略微增加目标物的回收率。因此确定提取试剂为1%甲酸-乙腈溶液，并加入2.5 g无水硫酸镁。

其次就是大型事务所的客户范围方面的对策。就客户的数量和质量而言，大型事务所应当借鉴国际化经营的思路，一方面是加入国际化事务所联盟的范畴，借助国际化的品牌与管理模式进行扩张。另一方面是直接“走出去”，向其他国家输出技术与业务。从这两个方面进一步增强自身实力与影响力。

综上所述，血清CA125不仅对诊断卵巢癌、子宫内膜癌和子宫内膜异位症有一定价值，其动态监测还可指导治疗和预测复发。

2.2.2 净化

土地是绿色矿业发展的的空间保障，在政策落地实施时，应遵循以绿色发展为核心，在完善全领域信用体系的同时，注重在绿色矿业发展示范区内创新矿业用地政策。

表 4 不同净化剂净化后的38 种农药总体回收率
Table 4 Effect of different purification methods on recoveries of 38 pesticides

     

净化材料 回收率/%中值 最小值 最大值 均值25 mg C18 96.8 86.5 118.7 99.6 25 mg PSA 92.6 85.9 116.3 97.5 25 mg GCB 68.4 11.6 118.5 69.3 25 mg超纯硅胶 85.3 50.4 115.9 81.7 25 mg弗罗里硅土 81.5 38.2 123.6 79.4 25 mg硅藻土 95.8 87.9 112.6 94.9 25 mg酸性氧化铝 95.7 59.7 120.5 89.5 25 mg碱性氧化铝 94.2 60.4 112.8 86.1 50 mg C18 95.2 84.9 112.7 96.8 50 mg PSA 90.3 84.1 109.5 94.3 50 mg硅藻土 96.2 86.7 111.8 95.7 50 mg C18＋50 mg PSA＋50 mg硅藻土 88.6 83.8 106.4 92.6

本实验除对QuEChERS方法常用净化材料C18、PSA、GCB进行考察外，还对超纯硅胶、弗罗里硅土、硅藻土、氧化铝等常见的固相萃取柱填料进行考察。由于GCB能够强烈吸附色素类物质，同时无选择性的对非极性农药也有吸附作用，降低大部分农药的回收率[27-28]。因此，本研究考察C18、PSA、GCB、超纯硅胶、弗罗里硅土、硅藻土、氧化铝等备选净化材料对待测物回收率的影响。具体步骤如下：在2.2.1节优化的提取条件下，取1.5 mL空白样品提取液（加标物）于2 mL离心管中，加入100 mg无水硫酸镁、25 mg净化剂（每个处理3 个平行），涡旋30 s，10 000 r/min离心10 min，取上清液，过0.22 µm滤膜，高效液相色谱-串联质谱检测。通过计算38 种农药的回收率考察净化剂对目标物的吸附情况，结果显示除C18、PSA和硅藻土外，其他净化剂均对少数目标物有一定的吸附，导致个别目标物回收率偏低（表4）。为提高净化效果，降低基质效应，本实验考察50 mg C18、PSA和硅藻土及其组合对目标物回收率的影响，结果显示增加净化剂的添加量，对目标物的回收率影响不大（表4）。故本实验最终选择50 mg C18＋50 mg PSA＋50 mg硅藻土作为净化剂。

2.3 方法评价

2.3.1 线性范围、检出限、定量限结果

表 5 38 种农药的标准曲线、相关系数、检出限和定量限Table 5 Linear ranges, LODs and LOQs of 38 pesticides

     

分析物 检出限/（µg/kg）定量限/（µg/kg）线性范围/（µg/kg）标准曲线相关系数R氯苯嘧啶醇 12.1 24.2 24.2～1 210 y=6 412.2x-20 453 0.999 9呋虫胺 9.9 19.8 19.8～990 y=14 791x＋48 385 0.999 9噻虫嗪 4.7 9.4 9.4～470 y=61 179x-33 279 0.999 9噻虫胺 10.0 20 20～1 000 y=98 231x-149 319 0.999 9吡虫啉 5.9 11.8 11.8～590 y=36 361x-40 187 0.999 9 3-羟基克百威 14.0 28 28～1 400 y=11 486x＋135 216 0.999 8啶虫脒 2.8 5.6 5.6～280 y=58 749x-35 671 0.999 9噻虫啉 1.2 2.4 2.4～120 y=36 172x-11 527 0.999 8克百威 0.8 1.6 1.6～80 y=289 596x-95 838 0.999 7甲萘威 11.1 22.2 22.2～1 110 y=33 242x＋137 016 0.999 7甲霜灵 8.6 17.2 17.2～860 y=224 149x-774 768 0.999 9氯吡脲 3.1 6.2 6.2～310 y=134 793x＋16 868 0.999 9氯虫苯甲酰胺 8.6 17.2 17.2～860 y=143 635x-200 772 0.999 8嘧菌酯 6.9 13.8 13.8～690 y=371 324x-3×106 0.999 5氯嘧磺隆 14.3 28.6 28.6～1 430 y=14 791x＋11 058 0.999 8多效唑 14.2 28.4 28.4～1 420 y=15 581x＋68 396 0.999 9戊炔草胺 6.8 13.6 13.6～680 y=22 137x＋72 007 0.999 9三唑酮 4.9 9.8 9.8～490 y=36 756x-101 591 0.999 7嘧霉胺 7.2 14.4 14.4～720 y=16 953x-120 413 0.999 5腈菌唑 3.7 7.4 7.4～370 y=48 175x-81 746 0.999 7氯唑磷 1.1 2.2 2.2～110 y=157 481x＋41 370 0.999 9氟环唑 1.4 2.8 2.8～140 y=114 399x-64 712 0.999 8啶氧菌酯 1.4 2.8 2.8～140 y=62 044x＋43 269 0.999 7虫酰肼 0.6 1.2 1.2～60 y=572 641x＋108 368 0.999 7丙环唑 10.2 20.4 20.4～1 020 y=40 350x＋95 261 0.999 9吡唑醚菌酯 6.9 13.8 13.8～690 y=33 527x-191 766 0.999 6辛硫磷 2.0 4 4～200 y=77 597x-109 134 0.999 6茚虫威 4.1 8.2 8.2～410 y=41 788x-89 693 0.999 7烯唑醇 12.3 24.6 24.6～1 230 y=20 575x＋95 539 0.999 9多杀菌素 8.2 16.4 16.4～820 y=64 661x＋57 614 0.999 8肟菌酯 8.4 16.8 16.8～840 y=134 409x-32 788 0.999 7硫线磷 1.7 3.4 3.4～170 y=294 044x＋50 167 0.999 9唑虫酰胺 3.4 6.8 6.8～340 y=170 163x-159 653 0.999 9甲维盐 1.7 3.4 3.4～170 y=214 495x-118 036 0.999 9唑螨酯 0.3 0.6 0.6～30 y=243 729x-4 064 0.999 9螺螨酯 26.2 52.4 52.4～2 620 y=7 416.4x-124 492 0.999 6氟啶脲 10.0 20 20～1 000 y=45 690x＋34 388 0.999 9哒螨灵 2.2 4.4 4.4～220 y=2×106x-387 371 0.999 9

在1.3.2节色谱质谱条件下，空白样品中添加一系列质量浓度的目标化合物，配制目标物的系列基质标准溶液（校准曲线应包括基质空白且至少有一个检出限附近的水平状态），经液相色谱-串联质谱测定后，以目标物质量浓度为横坐标（x/（µg/L）），质谱定量离子的峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，由GB/T 33260.2—2018《检出能力 第2部分：线性校准情形检出限的确定方法》计算目标物的检出限与定量限[29]。实验结果表明，检出限在0.3～26.2 µg/kg之间，定量限在0.6～52.4 µg/kg之间，具体结果见表5。

确定每个目标物的定量限后，按一定的比例配制高质量浓度混标目标物储存液。在空白样品提取液中添加一系列质量浓度上述混标目标物储存液，每个添加水平6 次重复，计算线性范围，绘制标准曲线。实验结果表明，目标物的线性相关系数（R）在0.999 5～0.999 9之间，能够满足定量分析的基本要求，具体结果见表5。

2.3.2 基质效应

4.网上共享库存，促进积压闲置物资的充分利用。中石化各企业间使用相同的ERP系统，应充分利用此优势，公开各企业的库存信息，建立积压物资信息平台。加大积压闲置物资资源信息的深度和广度，减少调拨环节，在有备件需求时，双方直接联系，直接交易。兄弟企业的信息沟通和业务交流，横向建立库存对调剂到兄弟企业的库存物资，坚持实行质量全检制度，确保调剂物资符合相关质量标准，能够安全使用，从而有效地减少企业物资积压，又促进了资源的有效利用，提高了企业经济效益。

采用高效液相色谱-串联质谱进行残留测定时应尽量避免基质效应[30]，同时基质效应也可反映净化效果。本研究采用相对响应值法对基质效应进行评价（基质效应=空白基质标准响应值/纯溶剂标准响应值），基质效应大于1为基质增强效应，反之则为基质抑制效应[10]；对瓯柑进行基质效应评价，实验结果表明38 种目标物均为基质抑制。未加净化剂（仅提取，不净化）时，基质效应在0.58～0.72之间；加净化剂（既提取，又净化）时，基质效应在0.66～0.98之间。基质效应对38 种目标物影响较大，因此必须使用基质标或添加同位素内标的方式消除基质效应影响。

记录患肢有无感染、固定有无松动及骨折愈合情况。骨折愈合标准：骨折局部无压痛，骨折线模糊或有连续骨痂形成，负重行走时无明显疼痛。按照Johner-Wruhs标准评定三组患肢功能恢复。

2.3.3 方法的准确度与精密度

在瓯柑中添加适当体积的38 种目标物混合标准溶液，使添加水平均分别为定量限、2 倍定量限和10 倍定量限。由表6可知，38 种化合物的平均加标回收率在70.1%～119.3%之间，相对标准偏差在2.7%～12.4%之间，方法具有较好的回收率和重复性。

我国的食品工业还处在初级阶段。第一，现在的中国食品工业90%是小企业、小作坊，规模以上的企业只有3.5万家，还不到总量的10%；第二，中国食品行业是一个完全竞争的产业，90%都是民营经济；第三，中国食品行业90%还处在初级加工阶段；第四，90%的企业基本上没有自己的专利，多数企业没有知名品牌。

表 6 38 种农药的加标平均回收率及相对标准偏差
Table 6 Average spiked recoveries and relative standard deviations of 38 pesticides

     

分析物 添加水平/（µg/kg）平均回收率/%相对标准偏差/% 分析物 添加水平/（µg/kg）平均回收率/%相对标准偏差/%24.2 76.1 12.3 7.4 113.5 7.6 48.4 82.2 10.3 14.8 110.9 6.1 242 86.8 7.5 74 106.2 4.8氯苯嘧啶醇 腈菌唑19.8 70.1 11.42.2 89.3 4.5 39.6 73.2 10.6 4.4 92.8 3.2 198 72.8 8.8 22 95.7 2.9呋虫胺 氯唑磷2.8 90.4 3.2 18.8 72.9 9.8 5.6 98.1 4.1 94 81.4 7.2 28 102.3 3.5 9.4 73.5 11.6噻虫嗪 氟环唑2.8 89.6 5.4 40 73.6 6.8 5.6 95.1 6.3 200 79.5 7.9 28 97.3 5.6 20 74.2 9.5噻虫胺 啶氧菌酯11.8 112.6 9.31.2 91.6 5.3 23.6 107.9 3.6 2.4 95.4 3.9 118 98.4 4.5 12 100.2 4.7吡虫啉 虫酰肼20.4 73.5 8.4 56 110.8 3.8 40.8 79.4 5.5 280 105.7 4.2 204 82.8 5.9 28 119.3 5.4 3-羟基克百威 丙环唑

续表6

     

分析物 添加水平/（µg/kg）平均回收率/%相对标准偏差/% 分析物 添加水平/（µg/kg）平均回收率/%相对标准偏差/%5.6 113.5 8.6啶虫脒13.8 79.3 9.4 11.2 108 3.9 27.6 88.1 5.7 56 99.2 4.3 138 86.2 7.4吡唑醚菌酯2.4 105.3 6.84 84.5 8.7 4.8 104.6 5.2 8 86.1 6.2 24 99.8 8.1 40 90.6 8.6噻虫啉 辛硫磷1.6 108 5.18.2 86.4 9.5 3.2 102.9 6.2 16.4 96.1 5.3 16 106.4 3.6 82 103.4 7.1克百威 茚虫威22.2 92.6 4.224.6 71.9 11.3 44.4 95.4 3.9 49.2 74.4 9.7 222 93.7 5.1 246 79.2 5.8甲萘威 烯唑醇17.2 106.4 9.316.4 72.6 11.7 34.4 110.5 4.8 32.8 78.1 9.7 172 98.8 3.6 164 84.6 6.5甲霜灵 多杀菌素16.8 75.1 12.1 12.4 83.4 5.4 33.6 83.6 7.4 62 91.2 4.3 168 80.6 6.5 6.2 75.5 6.1氯吡脲 肟菌酯17.2 109.4 6.1氯虫苯甲酰胺3.4 76.8 9.5 34.4 105.3 4.5 6.8 81.4 3.9 172 101 2.7 34 83.9 7.8硫线磷13.8 112.6 9.86.8 70.9 12.4 27.6 105.4 8.3 13.6 79.3 9.1 138 95.3 6.1 68 76.5 9.8嘧菌酯 唑虫酰胺28.6 106.3 5.43.4 72.9 11.5 57.2 93.5 3.2 6.8 75.6 8.2 286 90.1 7.6 34 79.5 6.4氯嘧磺隆 甲维盐28.4 114.2 6.40.6 75.4 9.8 56.8 109.7 5.7 1.2 78.5 8.3 284 106.7 3.9 6 82.6 6.5多效唑 唑螨酯13.6 71.9 9.352.4 71.3 11.2 27.2 78.5 7.4 104.8 73.9 9.4 136 75.4 8.1 524 84.2 5.6戊炔草胺 螺螨酯20 70.5 9.1 19.6 80.4 8.4 40 74.3 5.8 98 83.7 5.1 200 81.2 4.6 9.8 73.2 8.6三唑酮 氟啶脲14.4 79.5 10.44.4 72.1 10.9 28.8 86.1 7.2 8.8 79.6 8.1 144 83.4 6.8 44 83.5 5.6嘧霉胺 哒螨灵

2.4 实际样品测定结果

运用建立的检测方法，对实际样品进行分析。131 批次杨梅样品累计检测出8 种农药，嘧菌酯、啶虫脒、吡虫啉、甲萘威、甲维盐、嘧霉胺、噻虫嗪的检出率较高，检出率均高于3%。63 批次草莓样品累计检测出7 种农药，嘧霉胺、啶虫脒、氯虫苯甲酰胺、噻虫嗪、3-羟基克百威、嘧菌酯、克百威的检出率较高，检出率均高于3%。40 批次橘子、冬枣、葡萄、苹果、桃子、香蕉等其他水果检测出18 种农药，噻虫嗪、吡唑醚菌酯、吡虫啉、嘧菌酯、螺螨酯、丙环唑、嘧霉胺、氯唑磷、虫酰肼、啶虫脒、啶氧菌酯的检出率较高，检出率均高于3%。此外本研究还对蔬菜样品进行检测，60 批次大白菜、菠菜、芹菜、小青菜、豇豆、西红柿、辣椒、胡萝卜等蔬菜样品累计检测出19 种农药，噻虫嗪、啶虫脒、吡唑醚菌酯、丙环唑、三唑酮、甲霜灵、烯唑醇、吡虫啉、嘧霉胺、氯虫苯甲酰胺、甲维盐、唑虫酰胺、3-羟基克百威、克百威、氯唑磷、螺螨酯的检出率较高，检出率均高于3%。实际样品的具体检测结果见表7、图1。

表 7 样品检测结果
Table 7 Summary of analytical results for the determination of 38 pesticide residues in real samples

     

注：—.果蔬中无目标物的限量标准。

杨梅嘧菌酯 0.014 0.036 — 27.09啶虫脒 0.005 6 0.027 2 22.78吡虫啉 0.012 0.013 — 14.32甲萘威 0.022 0.025 — 11.41甲维盐 0.003 4 0.016 — 5.34嘧霉胺 0.014 0.047 — 3.82噻虫嗪 0.009 4 0.022 — 3.82氯虫苯甲酰胺 0.090 0.33 — 2.29草莓嘧霉胺 0.014 0.099 3 21.44啶虫脒 0.005 6 0.15 2 19.30氯虫苯甲酰胺 0.018 0.34 1 16.58噻虫嗪 0.009 4 0.048 — 12.72 3-羟基克百威 0.028 0.032 — 7.94嘧菌酯 0.014 0.017 — 3.17克百威 0.063 0.069 0.02 3.17蔬菜噻虫嗪 0.009 5 11.28 — 26.67啶虫脒 0.050 21.51 — 15.00吡唑醚菌酯 0.014 0.86 — 13.33丙环唑 0.16 11.30 — 10.00三唑酮 0.011 1.91 — 10.00甲霜灵 0.16 1.00 — 8.33烯唑醇 0.33 2.51 — 8.33吡虫啉 0.012 4.91 — 6.67嘧霉胺 0.015 0.12 — 6.67氯虫苯甲酰胺 0.024 28.53 — 6.67甲维盐 0.052 0.96 — 5.00唑虫酰胺 0.11 4.54 — 5.00 3-羟基克百威 0.028 0.43 — 3.33克百威 0.020 0.29 — 3.33氯唑磷 0.004 5 0.14 — 3.33螺螨酯 0.056 0.065 — 3.33嘧菌酯 2.80 — — 1.67腈菌唑 0.18 — — 1.67茚虫威 4.05 — — 1.67其他水果噻虫嗪 0.10 3.89 — 32.50吡唑醚菌酯 0.018 4.47 — 32.50吡虫啉 0.012 0.40 — 17.50嘧菌酯 0.016 10.36 — 15.00螺螨酯 0.052 0.29 — 12.50丙环唑 0.14 1.17 — 10.00嘧霉胺 0.016 3.26 — 10.00氯唑磷 0.12 0.82 — 10.00虫酰肼 0.31 1.89 — 10.00啶虫脒 0.005 8 0.43 — 5.00啶氧菌酯 0.36 0.53 — 5.00三唑酮 0.031 — — 2.50腈菌唑 0.35 — — 2.50烯唑醇 0.007 5 — — 2.50肟菌酯 0.26 — — 2.50甲维盐 0.13 — — 2.50哒螨灵 0.21 — — 2.50茚虫威 1.11 — — 2.50

   
   
   
     

图 1 样品检出参数的多反应监测图
Fig. 1 MRM chromatograms showing the retention times of pesticide residues in real samples

3 结 论

利用基质分散固相萃取结合高效液相色谱-串联质谱技术建立常见水果中农药残留多指标同步定性、定量检测技术。该方法使用改良的QuEChERS前处理技术，高效液相色谱-串联质谱测定，基质匹配外标法定量。对测定方法进行方法学验证，结果表明，38 种农药的方法检出限在0.3～26.2 µg/kg之间，定量限在0.6～52.4 µg/kg之间，线性相关系数（R）在0.999 5～0.999 9之间；平均加标回收率在70.1%～119.3%之间，相对标准偏差在2.7%～12.4%之间。该方法准确、快捷，对于推进政府监管部门执法、提高检测效率、降低检测成本、推进第三方检测市场整体技术进步等均具有重要的实践意义和社会效益，可应用于食品安全日常监测及突发事件应急处置工作中。

参考文献：

[1] 龙超. 蔬菜与水果农药残留检测中的质量控制措施[J]. 食品安全导刊, 2016(24): 59. DOI:10.16043/j.cnki.cfs.2016.24.040.

[2] 陈惠琴, 刘佳, 蓝梦哲. 蔬菜和水果中农残检测前处理技术研究进展[J]. 轻工科技, 2017, 33(6): 4-5; 29.

[3] 孟祥龙, 张云清, 范广宇, 等. 加速溶剂萃取-气相色谱-三重四极杆串联质谱法测定粮谷中的51 种农药残留[J]. 食品科学, 2016,37(22): 216-223. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201622033.

[4] 杨怀金, 叶芝祥. 微波萃取-气相色谱法(MAE-GC)测定菠菜中的乐果和敌敌畏[J]. 分析试验室, 2008, 27(S2): 41-43. DOI:10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2008.0530.

[5] 李佳钰, 吴雨杭, 李昊原, 等. 固相微萃取技术与应用研究进展[J].山东化工, 2016, 45(1): 43-45. DOI:10.19319/j.cnki.issn.1008-021x.2016.01.017.

[6] 刘苗, 甘平胜, 朱惠扬, 等. 全自动固相萃取-气相色谱-三重四级杆质谱法检测蔬菜中23 种农药残留[J]. 中国食品卫生杂志, 2016,28(4): 471-476. DOI:10.13590/j.cjfh.2016.04.013.

[7] 张凯歌, 胡玉玲, 胡玉斐, 等. 分子印迹微萃取技术的研究进展[J].色谱, 2012, 30(12): 1220-1228. DOI:10.3724/SP.J.1123.2012.08002.

[8] 刘祺文, 熊远福, 王锦, 等. 分子印迹固相萃取技术研究新进展[J]. 环境科技, 2015, 28(5): 63-67. DOI:10.3969/j.issn.1674-4829.2015.05.017.

[9] 李蓉, 储大可, 高永清, 等. 复合分子印迹固相萃取-HPLC-MS/MS法测定植物源性食品中多种农药残留[J]. 分析试验室, 2015, 34(8):907-912. DOI:10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2015.0196.

[10] 张爱芝, 王全林, 曹丽丽, 等. QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中250 种农药残留[J]. 色谱, 2016, 34(2): 158-164.DOI:10.3724/SP.J.1123.2015.09026.

[11] CUNHA S C, LEHOTAY S J, MASTOVSKA K, et al. Evaluation of the QuEChERS sample preparation approach for the analysis of pesticide residues in olives[J]. Separation Science, 2007, 30(4): 620-632. DOI:10.1002/jssc.200600410.

[12] NADJA L, DRAZEN K, ELLEN S, et al. Pesticide residues in strawberries sampled from the market of the federal state of badenwurttemberg in the period between 2002 and 2005[J]. Journal Fur Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit, 2006, 1(2): 135-141.DOI:10.1007/s00003-006-0022-5.

[13] OKIHASHI M, KITAGAWA Y, AKUTSU K, et al. Rapid method for the drtermination of 180 pesticide residues in foods by gas chromatography/mass spectrometry and flam photometric detection[J].Journal of Pesticide Science, 2005, 30(4): 368-377. DOI:10.1584/jpestics.30.368.

[14] LESUEYR C, KNITTL P, GARTNER M, et al. Analysis of 140 pesticides from conventional farming foodstuff samples after extraction with the modified QuEChERS method[J]. Food Control,2008, 19(9): 906-914. DOI:10.1016/j.foodcont.2007.09.002.

[15] SCHENCK F, WONG J, LU C, et al. Multiresidue analysis of 102 organophosphorus pesticides in produce at parts-perbillion levels using a modified QuEChERS method and gas chromatography with pulsed flame photometric detection[J]. Journal of AOAC International, 2009,92(2): 561-573.

[16] 孙志高, 盛冉, 郝静梅, 等. QuEChERS-高效液相色谱法检测柑桔中毒死蜱、吡虫啉和残杀威农残[J]. 食品与机械, 2017, 33(6): 68-72.DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2017.06.014.

[17] 钟志凌, 唐吉旺. 基于QuEChERS净化-气相色谱法同时测定蔬菜中6 种有机磷类农药残留[J]. 分析测试技术与仪器, 2019, 25(1):22-27. DOI:10.16495/j.1006-3757.2019.01.005.

[18] 兰丰, 姚杰, 周先学, 等. QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬中螺虫乙酯、丁醚脲及代谢物残留[J]. 农药学学报, 2019,21(2): 219-226. DOI:10.16801/j.issn.1008-7303.2019.0029.

[19] 兰丰, 李晓亮, 段小娜, 等. 固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定美国进口水果中15 种高风险农药及助剂残留[J]. 农药学学报,2019, 21(4): 475-482. DOI:10.16801/j.issn.1008-7303.2019.0060.

[20] 林海丹, 谢守新, 王岚, 等. 超高效液相色谱串联质谱法测定果蔬中13 种植物生长调节剂残留量[J]. 广东农业科学, 2015, 42(9): 82-87.DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2015.09.007.

[21] 辛平, 徐银萍, 成娟, 等. 气质联用法(GC-MS)测定水果中农药残留含量[J]. 林业科技通讯, 2015(9): 59-61. DOI:10.13456/j.cnki.lykt.2015.09.020.

[22] 敬小波, 李圣陶, 黎欢. 基于QuEChERS方法结合气相色谱-串联质谱法测定水果蔬菜中22 种农药残留[J]. 江西化工, 2019(3): 63-67.DOI:10.14127/j.cnki.jiangxihuagong.2019.03.020.

[23] 甘静妮, 程雪梅, 莫晓君, 等. 分散固相萃取/气相色谱-三重四极杆串联质谱测定蔬菜和水果中67 种农药残留[J]. 分析测试学报,2016, 35(12): 1528-1534. DOI:10.3969/j.issn.1004-4957.2016.12.003.

[24] 庞国芳, 范春林, 曹彦忠, 等. 农药残留高通量检测技术: 第一卷(植物源产品): 上卷[M]. 北京: 中国农业出版社, 2014.

[25] LEHOTAY S J, KOK A, HIEMSTRA M, et al. Validation of a fast and easy method for the determination of residues from 229 pesticides in fruits and vegetables using gas and liquid chromatography and mass spectrometric detection[J]. Journal of AOAC International, 2005,88(2): 595-614.

[26] LEHOTAY S J, MASTOVSKA K, LIGHTFIELD A R. Use of buffering and other means to improve results of problematic pesticides in a fast and easy method for residue analysis of fruits and vegetables[J]. Journal of AOAC International, 2005, 88(2): 615-629.

[27] ANASTASSIADES M, LEHOTAY S J, STAJNBAHER D, et al.Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and dispersive solid-phase extraction for the determination of pesticide residues in produce[J]. Journal of AOAC International,2003, 86(2): 412-431.

[28] 宋淑玲, 李重九, 马晓东, 等. 蔬菜中残留农药的石墨化碳黑净化和气相色谱-质谱检测方法[J]. 分析化学, 2008, 36(11): 1526-1530.DOI:10.3321/j.issn:0253-3820.2008.11.014.

[29] 国家市场监督管理总局. 检出能力 第2部分: 线性校准情形检出限的确定方法: GB/T 33260.2—2018[S]. 北京: 中国标准出版社, 2018.

[30] NARDIC D, BONELLI F. Moving from fast to ballistic gradient in liquid chromatography/tandem mass spectrometry pharmaceutical bioanalysis: matrix effect and chromatographic evaluations[J]. Rapid Communications in Mass Spectrometry, 2006, 20(18): 2709-2716.DOI:10.1002/rcm.2649.

Simultaneous Determination of Residues of 38 Pesticides in Fruits by QuEChERS Combined with High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

LIANG Xiumei1, ZHANG Weiyi1, ZHANG Wei2, XIE Shibing1, HE Ruyi1, XU Jing1, SU Laijin1, SUN Bolun3, ZHANG Jing1,*
(1. Experimental Station of Agricultural Products Quality Safety Risk Assessment, Ministry of Agriculture and Rural Affairs,Wenzhou Research Center of Characteristic Food Resources Engineering and Technology, Wenzhou Academy of Agricultural Sciences,Wenzhou 325006, China; 2. Zhoushan Institute for Food and Drug Control, Zhoushan 316000, China;3. College of Food and Pharmaceutical Sciences, Ningbo University, Ningbo 315000, China)

Abstract: A method for the determination of the residues of 38 pesticides in fruits was established. After being ground,the pesticide residues in samples were extracted with 1% acetic acid-acetonitril and dehydrated with anhydrous magnesium sulfate. Then, the pesticide residues in the supernatant were cleaned up with octadecylsilane (C18), primary secondary amine(PSA) and diatomite before being subjected to high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLCMS/MS) analysis. The separation was performed on an Accucore aQ column. The electrospray ionization mass spectrometry was operated in the positive mode using multiple reaction monitoring (MRM) and the analytes were quantified by the external standard method. The results indicated that the limits of detection (LODs) for all the pesticides were in the range of 0.3–26.2 µg/kg, and the limits of quantitation (LOQs) ranged from 0.6 to 52.4 µg/kg. The correlation coefficients (R) of the calibration curves were in the range of 0.999 5–0.999 9. The average recoveries at three spiked levels ranged from 70.1% to 119.3% (n = 6) with relative standard deviations (RSDs) of 2.7%–12.4%. The method was rapid, sensitive and precise, and could provide technical support for the determination of pesticide residues in fruits.

Keywords: fruits; QuEChERS; high performance liquid chromatography-mass spectrometry; pesticide residues

收稿日期：2019-10-18

基金项目：浙江省科技厅公益性项目（2017C37087）

第一作者简介：梁秀美（1990—）（ORCID: 0000-0003-2130-572X），女，助理实验师，硕士，研究方向为农产品质量安全。E-mail: 2463403806@qq.com

*通信作者简介：张井（1984—）（ORCID: 0000-0001-7791-7173），男，副研究员，硕士，研究方向为农产品质量安全。E-mail: 287814835@qq.com

DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191018-199

中图分类号：TS255

文献标志码：A

文章编号：1002-6630（2020）08-0288-09

引文格式：

梁秀美, 张维一, 张微, 等. QuEChERS-HPLC-MS/MS法同时测定水果中38 种农药的残留量[J]. 食品科学, 2020, 41(8):288-296. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191018-199. http://www.spkx.net.cn

LIANG Xiumei, ZHANG Weiyi, ZHANG Wei, et al. Simultaneous determination of residues of 38 pesticides in fruits by QuEChERS combined with high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Science, 2020,41(8): 288-296. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20191018-199. http://www.spkx.net.cn