鸭油的体外抗氧化活性分析
鸭油的体外抗氧化活性分析鸭油的体外抗氧化活性分析龙 霞1，宁俊丽1，黄先智2，丁晓雯1,*（1.西南大学食品科学学院，重庆市农产品加工及贮藏重点实验室，食品科学与工程国家级实验教学示范中心，重庆 400716；2.西南大学科技处，重庆 400715）摘 要：目的：评价鸭油体外抗脂质、蛋白质、DNA等生物大分子物质的氧化活性，为进一步研究其体内抗氧化能力提供依据。方法：测定鸭油对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical，DPPH）自由基的清除率、铁还原能力（ferric ion reducing antioxidant power，FRAP）、氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）、抑制β-胡萝卜素褪色能力、对牛血清白蛋白羰基含量的影响、DNA保护潜力。结果：鸭油清除DPPH自由基的半抑制质量浓度为（15.03±0.53）mg/mL；当鸭油质量浓度为35 mg/mL时，FRAP为（241.87±3.05）μmol/L，ORAC为（2.59±0.15）μmol TE/g，对β-胡萝卜素褪色的抑制率为（67.29±3.37）%。鸭油质量浓度较低时可保护牛血清白蛋白，但剂量为6 mL/g蛋白时，会导致牛血清白蛋白羰基含量增加（50.00±3.21）%。1 mg/mL的鸭油对DNA的保护率为（43.27±0.01）%。结论：鸭油在体外具有DPPH自由基清除能力、FRAP、ORAC，能抵制脂质、DNA的氧化应激。关键词：鸭油；抗氧化活性；脂肪酸；蛋白质；DNA人或动物细胞在受到氮氧化合物、病原体等刺激后，氧化系统和抗氧化系统的平衡被打破，使机体积累大量活性氧。活性氧可以攻击生物体内的蛋白质、脂质、DNA等生物大分子，最终导致机体产生氧化应激作用，从而导致诸如动脉粥样硬化、心血管疾病、癌症等慢性病的发生。研究表明，油酸、亚油酸、亚麻酸、VE等具有抗氧化作用，可改善机体的氧化应激能力，如富含不饱和脂肪酸的猕猴桃籽油对DNA有保护作用，植物多酚能降低H2O2诱导的肌纤维蛋白氧化损伤。与鸭油同为禽类油脂，不饱和脂肪酸质量分数达65%的鹅油具有改善氧化应激的作用，如张佰帅等的研究表明，鹅油能使小鼠的总抗氧化能力提高73.95%；刘金枝的研究也表明，鹅油能使卵巢切除大鼠的总抗氧化能力提高19.63%；韩海娜的研究表明鹅油甘油二酯微胶囊能使大鼠的抗氧化能力提高21.88%。近年来从“扶贫”到“共享”的政策目标切换在生存照顾之外向社会救助权注入了平等促进、自立发展两种新的价值，政策目标的变化也导致法律体系中对社会救助权塑造的宪法基点的变迁，即不同于西方社会救助权以生存权为基点的情形，具有本土色彩的社会救助权应当建立在《宪法》规定的物质帮助权、平等权和人格尊严三个基点之上。 鸭油是鸭屠宰过程中的副产品，主要从板油、腹部脂肪组织、皮下组织、肝脏等组织中经提炼、加工而成的固态或半固态脂类。有研究表明，鸭油以棕榈酸、棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸为主，不饱和脂肪酸质量分数可达70.30%，接近维持人体健康的理想值。关于含有大量油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸的鸭油是否能抵抗活性氧对脂质、蛋白质、DNA等生物大分子的影响报道极少。因此，本实验通过测定鸭油的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical，DPPH）自由基清除率、铁还原能力（ferric ion reducing antioxidant power，FRAP）、氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC），评价鸭油在体外是否具有抗氧化活性；通过测定鸭油对β-胡萝卜素褪色的抑制率、对蛋白质的影响、对DNA的保护潜力，评价鸭油在体外对生物大分子抗氧化能力的影响，为鸭油的深入开发利用提供依据。1 材料与方法1.1 材料与试剂鸭油为实验室自提：鸭油与石油醚质量体积比为1∶5，加入体积分数0.015%的叔丁基对苯二酚（tertiary butylhydroquinone，TBHQ），于360 W、30 ℃条件下超声提取43 min，将提取液于60 ℃旋蒸，去除石油醚得到粗提取鸭油。将粗提取的鸭油加入1%质量分数为75%的磷酸脱胶，加入2%的白陶土脱色，95 ℃旋转蒸发3 h脱臭后得到精炼鸭油。精炼鸭油的酸价为（0.96±0.03）mg/g，过氧化值为（0.085±0.010）g/100 g，符合GB 10146—2015《食品安全国家标准 食用动物油脂》的要求。TBHQ（纯度大于99%） 南京道斯夫生物科技有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 美国Sigma公司；Gene Green核酸染料 北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；FeCl3、FeSO4、2,4-二硝基苯肼（2,4-dinitrophenylhydrazine，DNPH）、盐酸胍、乙酸乙酯 上海麦克林生化科技有限公司；荧光素钠（fluorescein sodium，FL）、β-胡萝卜素、亚油酸上海Aladdin公司；三吡啶三吖嗪（tripyridyl-triazine，TPTZ）、水溶性VE（Trolox）、2,2’-偶氮二（2-脒基丙烷）二盐酸盐（2,2’-azobisdihydrochloride，AAPH）、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、哌嗪-N,N’-双(2-乙磺酸)（piperazine-1,4-bisethanesulfonic acid，PIPES）、pUC19质粒DNA、琼脂糖、10×Loading buffer、50×TAE电泳缓冲液北京索莱宝公司。1.2 仪器与设备Symergy H1酶标仪 美国伯腾仪器有限公司；5811DK离心机 德国Eppendorf公司；真空旋转蒸发器；DYY-6D DNA凝聚电泳仪 北京六一生物科技有限公司；Geno Sens 1860 Gel Documentation System 上海勤翔科学仪器有限公司；XW-80A微型旋涡混合仪上海沪西仪器厂有限公司；RE52CS-1旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂；pHS-3C+智能酸度计 成都世纪方舟科技有限公司。“无畏派有句老话，训练可以消除懦弱，在恐惧之中行动将被视为失败，”老四说，“因此，考验的每一关你们都要做好不同方面的准备。第一关主要是身体素质，第二关主要是情感素质，第三关主要是心理素质。” 1.3 方法1.3.1 样品的制备企业一味追求当前销售额的最大化，尽管为鼓励债务人按时还款提出了很多商业优惠，但却忽视了信息查询系统对严重失信企业的公告，没有及时、定期查询往来客户的信用记录，对客户的信用信息缺乏详细的分析判断。导致企业应收账款长期无法收回，发生的坏账也无法采取及时的补救措施，致使企业资金受到严重损失。 鸭油富含不饱和脂肪酸，在提取、精炼过程中易被氧化，因此从鸭油的加工开始就需要加入抗氧化剂。根据本实验室前期的研究，加入TBHQ（添加量为鸭油质量的0.015%）作为鸭油抗氧化剂的效果最好。提取、精炼得到的鸭油置于棕色瓶中4 ℃保存备用。不同质量浓度纯鸭油：用无水乙醇将精炼鸭油（提取过程中不加抗氧化剂）分别配制为质量浓度5、10、15、20、25、30、35 mg/mL的溶液。不同质量浓度鸭油+TBHQ：用无水乙醇将精炼鸭油（提取过程中加0.015%的TBHQ作抗氧化剂）分别配制为质量浓度5、10、15、20、25、30、35 mg/mL的溶液。不同质量浓度TBHQ：用无水乙醇将TBHQ分别配制为与鸭油中所含质量浓度相同的溶液，即0.75、1.5、2.25、3、3.75、4.5、5.25 μg/mL。1.3.2 DPPH自由基清除率的测定参照文献的方法并作适当修改。1.0 mL浓度为0.093 mmol/L DPPH-无水乙醇溶液与1.0 mL样品混匀，室温避光放置30 min。空白组以1.0 mL无水乙醇代替DPPH溶液，相同方法处理。1.0 mL无水乙醇代替样品，相同方法处理，作为对照组。于517 nm波长处测定吸光度，DPPH自由基清除率计算见式（1）。对于任何植物的生长而言，土壤都是非常重要的一项元素，在进行林木种苗培育的过程中，对于土壤的管护更是重中之重。管理人员应该首先确认林木种苗种植的土壤是否可以满足林木生长的需求，通过选择质地优秀的土壤，可以更好的为种苗的生长提供帮助。 http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/2aee4e18d309ae4243a34ed95b4b4849.jpg式中：A0为对照组吸光度；A1为样品组吸光度；A2为空白组吸光度。1.3.3 FRAP的测定参照Martínez等的方法略作修改。取1.0 mL不同质量浓度的鸭油或TBHQ溶液，加入2.0 mL FRAP试剂混匀，于37 ℃水浴30 min，5 000×g离心10 min后于595 nm波长处测吸光度。将吸光度带入硫酸亚铁标准曲线，获取相应的硫酸亚铁浓度定义为FRAP，单位为μmol/L。参照Zhang Yuan等的方法，在微型离心管中加入5 μL质量浓度为60 ng/μL的pUC19质粒DNA，2 μL 30%的H2O2和5 μL不同质量浓度的鸭油（0.2、0.4、0.6、0.8、1 mg/mL）或TBHQ溶液（与鸭油中所含的质量浓度相同），310 nm的紫外光下辐射10 min后，载入1%的琼脂糖，在电压220 V、电流190 mA条件下电泳10 min。以蒸馏水代替样品作为氧化组（不加样品保护）。以蒸馏水代替H2O2且不经过紫外线辐射作为空白组（不经氧化处理）。用Image Lab软件分析DNA含量。不同质量浓度样品对DNA的保护作用率见式（4）。1.3.4 β-胡萝卜素褪色抑制率的测定下一秒，所有的想念与期待，怦然爆发。场景里绿色的松树，彩色的礼品盒通通变成了五彩的背景色。Merry Christmas的歌曲，萦绕回荡耳边。抱着一袋子礼物，她跑出来跳上了车。这样会很唐突吧？但她真的好想去见酒刀先生。 人行道系统在过桥列车的动荷载激励下，呈明显的动力反应特征，托架对列车激励有较大的动力放大效应，螺栓在交变荷载作用下，承受更大的反复应力作用，产生疲劳损伤，出现裂纹而不断扩展，最终发生脆断。因此，人行道托架螺栓在列车荷载的作用下受反复动应力作用产生疲劳破坏是导致螺栓折断的主要原因。 参照Shon等的方法略作修改。在96 孔微孔板中，加入50 μL不同质量浓度的鸭油或TBHQ溶液、200 μL β-胡萝卜素-亚油酸乳化液。对照孔以无水乙醇代替样品，做同样处理。50 ℃、80 r/min摇床混匀1 min，于470 nm波长处测定反应0、120 min后的吸光度，分别记为A0和A120，ΔA＝A0-A120。不同质量浓度的样品对β-胡萝卜素-亚油酸乳化液褪色的抑制率的计算见式（2）。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/9592a27783402797ddd2c44a4d62ff9c.jpg
式中：ΔA0表示对照孔的吸光度变化量；ΔAi表示加入样品的吸光度变化量。1.3.5 鸭油抗氧化能力指数的测定参照赵建、续洁琨等的方法测定ORAC，在黑色96 孔微孔板中加20 μL不同质量浓度的鸭油或TBHQ或Trolox标准溶液，再加入20 μL浓度为63 nmol/L的FL使用液，37 ℃孵育5 min后加6 mmol/L的AAPH溶液140 μL。以激发波长485 nm、发射波长538 nm，4 min/次的条件测定各孔荧光强度，连续测定2 h，整个测定过程保持37 ℃。同时测定FL荧光自然衰减对照（-AAPH）即未添加自由基，溶剂对照（+AAPH）即未添加样品。1.3.6 鸭油对蛋白羰基的影响参照曹云刚、Park等的方法，以15 mmol/L的PIPES缓冲液（pH 6.0）构建氧化体系，使FeCl3浓度为0.01 mmol/L，VC浓度为0.1 mmol/L，H2O2浓度1 mmol/L。将BSA分散于上述氧化体系中（终质量浓度为40 mg/mL），加入鸭油或TBHQ，鸭油加入量分别为：1、2、3、4、5、6 mL/g，以BSA质量计。密封后于4 ℃氧化12 h，用1 mmol/L乙二胺四乙酸终止反应，同时以未加H2O2作空白组，以未加样品作为对照组。采用“国食药监保化107号”文中《关于印发抗氧化功能评价方法等9 个保健功能评价方法的通知》的方法测定反应液中蛋白羰基含量。不同浓度样品对氧化生成蛋白质羰基的抑制率见式（3）。绘制FeSO4标准曲线：取1.0 mL浓度分别为25、50、100、200、400、800、1 000 μmol/L的FeSO4溶液，按测定样品方法处理后测定吸光度，以FeSO4浓度作横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线并得线性回归方程。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/b29af4d05e75657d0ee191e8f7b1fd59.jpg
1.3.7 鸭油对DNA保护潜力的测定ERP不仅能提高工作效率，密切联系企业内外部的各种信息资源，挖掘ERP巨大的信息价值，从而获得数据信息的集成管理，进而为企业领导者提供最为准确、及时的各种数据信息，使企业决策者做出最合理的决策，直接体现了战略性的价值。因此，ERP系统能够更好的解决企业的预算管理，为财务管理提供了更加便捷的条件。 论年龄，招财比宝玉爹宝刚爹他们小了十多岁，可比我和健保、牛伢这一拨后生又大了十多岁。论辈分，他比宝玉爹宝刚爹还高出一辈。只是乡下人到了二十世纪六十七十年代，也不那么讲究了，大多以年龄大小来确定身份，故招财喊宝玉爹为叔，喊桂娭毑为婶，不足为怪。 http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/db6b9ee589e7613b3af8c956011b68d9.jpg
1.4 数据统计与分析所有实验均重复3 次以上，结果用 ±s表示。采用SPSS 24.0、Excel 2016软件进行数据分析，Origin 2018软件作图，Image Lab软件处理电泳图像。数据采用单因素方程分析——最小显著性差异（least significant difference，LSD）检验进行差异显著性分析（P＜0.05）。2 结果与分析2.1 鸭油对DPPH自由基的清除作用DPPH自由基是以氮为中心稳定的自由基。加入抗氧化剂后反应体系在517 nm波长处的吸光度下降，下降率越高代表样品对DPPH自由基的清除能力越强。因该法稳定、快速，已被广泛应用于评价抗氧化能力。采用该法测定不同质量浓度鸭油对DPPH自由基的清除率见图1。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/dc5054c62389d0549cde6651457b78f4.jpg&p=776x408&q=30 图 1 不同质量浓度鸭油对DPPH自由基的清除率
Fig. 1 DPPH radical scavenging capacity of duck lipids at different concentrations
由图1可知，纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ对DPPH自由基都具有清除作用，且随着质量浓度的增加，它们对DPPH自由基清除率也在增加。鸭油+TBHQ组对DPPH自由基的清除率高于同质量浓度纯鸭油、同质量浓度TBHQ的清除率，且差异均显著（P＜0.05）。加有TBHQ的鸭油质量浓度为35 mg/mL时，对DPPH自由基的清除率可达（78.81±2.96）%；其中所含TBHQ对DPPH自由基的清除率为（47.27±2.76）%。纯鸭油质量浓度为35 mg/mL时，对DPPH自由基的清除率为（23.19±4.18）%；由此推测，加TBHQ能够提高鸭油对DPPH自由基的清除作用可能是TBHQ与鸭油的协同作用的结果。通过SPSS 24.0软件分析证明，鸭油对0.093 mmol/L的DPPH自由基的半抑制质量浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50）为（15.03±0.53）mg/mL，接近于Bennett等对鸭油的测定结果，但低于鱼油对DPPH自由基清除作用的IC50。不同质量浓度鸭油在5～25 mg/mL范围内对DPPH自由基的清除率差异不显著，可能因为低质量浓度的纯鸭油清除能力较低。不同质量浓度的鸭油+TBHQ组DPPH自由基清除率差异显著，可能是TBHQ提高了鸭油对DPPH自由基的清除能力所致。2.2 鸭油的FRAPFRAP是抗氧化物在酸性环境还原Fe3+-TPTZ产生蓝紫色Fe2+-TPTZ的能力，其可作为样品中总抗氧化能力的评价指标。通常，物质对Fe3+-TPTZ的还原能力与抗氧化能力成正相关。测定不同质量浓度鸭油的铁还原能力结果如图2所示。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/c3c036ba8c6b1eeaf1fa391894930bf7.jpg&p=630x342&q=30 图 2 不同质量浓度鸭油的FRAP
Fig. 2 FRAP values of duck lipids at different concentrations
由图2可知，纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ都有一定的FRAP，且随着质量浓度的增加，其FRAP也在增加。不同质量浓度鸭油+TBHQ的FRAP显著高于同质量浓度纯鸭油和TBHQ的FRAP，纯鸭油质量浓度为35 mg/mL时，其FRAP为（219.87±3.06）μmol/L，而同质量浓度鸭油所含TBHQ的FRAP为（169.53±4.04）μmol/L，鸭油+TBHQ的FRAP为（241.87±3.06）μmol/L，表明TBHQ对鸭油的铁还原能力有一定的促进作用。纯鸭油质量浓度在5～30 mg/mL时，其FRAP显著低于35 mg/mL的（219.87±3.06）μmol/L，表明低质量浓度鸭油的铁还原能力较低。不同质量浓度的鸭油+TBHQ的FRAP差异显著，可能是TBHQ提高了鸭油的铁还原能力。综上,佐匹克隆与艾司唑仑,是治疗老年睡眠障碍的常用药,相比而言,佐匹克隆,效果更显著,有助于改善患者睡眠质量,不良反应少,安全性高,值得推广。 理国要道，在于公平正直。从党的十八大提出“进一步深化司法体制改革”，到党的十九大要求“深化司法体制综合配套改革”，以习近平同志为核心的党中央从全面推进依法治国，实现国家治理体系和治理能力现代化的高度，擘画司法体制改革宏伟蓝图，加快建设公正高效权威的社会主义司法制度。 2.3 鸭油的抗氧化能力指数抗氧化能力指数是评估物质总抗氧化能力的国际方法，是美国农业部、国家卫生院、食品药品监督管理局评价物质抗氧化能力的重要标准。在该测定方法中，抗氧化物质存在时的荧光衰退曲线下面积与无抗氧化剂存在时的荧光衰退曲线下面积之差表示抗氧化剂的保护面积（net area under curve，Net AUC）。Net AUC越大，抗氧化剂对荧光物质的保护作用越强。不同质量浓度鸭油的Net AUC如图3所示。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/9bdade2e63bf1b2888fd4ca914ed3f1a.jpg&p=572x316&q=30 图 3 不同质量浓度鸭油的Net AUC
Fig. 3 Net AUC of duck lipids at different concentrations
由图3可知，随着纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ质量浓度的增加，它们的Net AUC也在增加，鸭油+TBHQ组、纯鸭油组的Net AUC显著高于TBHQ组，表明鸭油能显著延缓FL荧光的衰退。纯鸭油、鸭油+TBHQ的质量浓度在5～25 mg/mL时，鸭油+TBHQ组的Net AUC显著高于纯鸭油；在30～35 mg/mL时，Net AUC虽低于鸭油组，但差异不显著，表明TBHQ可能会增强鸭油对FL荧光的保护作用。抗氧化剂的抗氧化能力指数（ORAC）是抗氧化剂的荧光衰退曲线保护面积与标准抗氧化物质的保护面积之比，代表样品对自由基的抗氧化能力，其越高代表抗氧化能力越强。不同质量浓度鸭油的ORAC见表1。表 1 不同质量浓度鸭油的ORAC及相关性
Table 1 ORAC values of duck lipids at different concentrations and correlation analysishttp://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/5e2c22e97326594e0950badf57751cd6.jpg&q=30 注：同列大写字母不同，表示同一质量浓度不同样品间差异显著（P＜0.05）；同行小写字母不同表示同一样品不同质量浓度间差异显著（P＜0.05）。质量浓度/（mg/mL）组别r P 5 10 15 20 25 30 35鸭油 0.65±0.04Aa 0.68±0.02Aa 0.77±0.02Aa 0.84±0.03Aa 0.85±0.09Aa 1.54±0.09Ab 2.64±0.24Ac 0.824 0.023鸭油+TBHQ 0.75±0.04Aa 0.76±0.10Aa 0.84±0.01Aab 0.98±0.11Ab 1.17±0.22Ab 1.49±0.11Ac 2.59±0.15Ad 0.859 0.013 TBHQ 3 844.03±36.15Ba4 092.36±52.42Bab4 327.15±38.45Bb4 547.51±67.48Bb4 965.21±21.65Bc5 839.89±31.69Bd8 771.24±32.46Be0.855 0.014
由表1可知，纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ均具有一定的ORAC，随着其质量浓度的升高，ORAC也在增加。用SPSS软件进行相关性分析发现，（P＜0.05）浓度与ORAC的r＞0.800，P＜0.05，表明它们的抗氧化能力与浓度存在显著正相关。纯鸭油质量浓度在5～25 mg/mL的范围内，其各质量浓度的ORAC差异不显著，质量浓度增加至35 mg/mL时，差异显著。TBHQ的各组ORAC显著大于同浓度的纯鸭油组、鸭油+TBHQ组，可能与TBHQ是强抗氧化剂有关。总而言之，我国国库集中支付制度推广了十几年，这项制度对高校财务管理造成了较大影响，有利于高校财务管理体系的构建。从当前情况来看，很多高校在财务管理系统方面仍不够完善，在未来的发展中，高校领导要转变观念，充分认识到国库集中支付制度的优点、注重高校内部预算管理的科学化、优化财务管理组织机构、建立完善的财务信息管理系统、拓宽办学资金来源，以高校国库集中支付给财务管理制度带来的变化为出发点，强化自身财务管理体系的构建，实现高校的正常运行和教育目的。 2.4 鸭油对β-胡萝卜素褪色的抑制作用β-胡萝卜素-亚油酸体系中的亚油酸自动氧化生成的过氧化自由基会使黄色的β-胡萝卜素褪色，当体系中有抗氧化剂时，则β-胡萝卜素的褪色受到抑制，可评价样品在乳化体系中的抗氧化能力。不同质量浓度鸭油对β-胡萝卜素的褪色抑制作用如图4所示。将分离的6株单菌进行2天的活化培养，将培养至对数生长期的6株单菌各取1 mL进行混合，混合均匀后再进行活化，当构成混合菌群菌液的浓度达到108CFU/mL时，（YJ01）用含油的无机盐培养基进行下一步的培养. http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/85fe3f315f95d9f60c96c9523d061649.jpg&p=624x362&q=30 图 4 不同质量浓度鸭油对β-胡萝卜素的褪色抑制率
Fig. 4 Inhibition rates of β-carotene degradation by duck lipids at different concentrations
由图4可知，纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ对β-胡萝卜素褪色均有明显的抑制作用，且随着质量浓度的增加，它们的抑制作用增强。TBHQ对β-胡萝卜素褪色的抑制作用均显著低于纯鸭油和鸭油+TBHQ的。加有TBHQ的鸭油质量浓度为35 mg/mL时，对β-胡萝卜素褪色的抑制率可达（67.29±3.37）%，纯鸭油的抑制率为（55.47±1.76）%，TBHQ的抑制率仅为（39.61±0.76）%，表明TBHQ有助于增强鸭油对β-胡萝卜素褪色的抑制能力。2.5 鸭油抗蛋白质氧化损伤能力蛋白质在自由基、氧化物作用下，肽链断裂、氨基酸残基侧链氧化修饰，其结构发生变化而导致氧化损伤。蛋白质羰基是蛋白质氧化损伤的重要标志物，测定其含量可判断蛋白质是否被氧化，蛋白质羰基含量越高表示蛋白质被氧化的程度越严重，而受试物抗蛋白氧化的能力越低。不同质量浓度鸭油对蛋白质羰基生成抑制率的结果见图5。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/b7c95fb358d30bcc76fa1897f8f87f0a.jpg&p=622x342&q=30 图 5 不同鸭油加入量对BSA羰基含量的影响
Fig. 5 Effect of duck lipids at different concentrations on carbonyl content of BSA
由图5可知，纯鸭油、鸭油+TBHQ的蛋白羰基生成抑制率随着其剂量的增加而降低，即随着它们剂量的增加蛋白质生成的羰基越多，表明鸭油、鸭油+TBHQ可能会促进BSA氧化。当鸭油+TBHQ剂量为6 mL/g时，会导致BSA羰基含量增加（50.00±3.21）%；纯鸭油剂量为6 mL/g蛋白时，会导致BSA羰基含量增加（50.71±1.57）%。TBHQ组的蛋白质羰基生成抑制率随着其剂量的增加而增强，蛋白质羰基含量减少，表明TBHQ浓度越高，对BSA的保护作用越强。鸭油+TBHQ剂量为1～3 mL/g时，其蛋白羰基生成抑制率显著高于同剂量纯鸭油的，可能是TBHQ在一定程度上会抑制鸭油对BSA的损伤。纯鸭油剂量在1～4 mL/g范围内，可以抵抗BSA的氧化应激，随着剂量的增加，其抵制作用显著下降，当剂量在5～6 mL/g时，促进BSA氧化；鸭油+TBHQ剂量在1～5 mL/g范围内，可以抵制BSA的氧化应激，随着剂量的增加，其抵制作用显著降低，当剂量在6 mL/g时，促进BSA氧化；不同剂量的TBHQ对BSA的保护作用显著升高，提示TBHQ可能会降低鸭油对BSA的氧化。2.6 鸭油对DNA的保护潜力生物体内的活性氧自由基可导致DNA链断裂、DNA位点突变、DNA双链畸变、原癌基因突变、肿瘤抑制基因突变等形式的DNA损伤。为探究鸭油对紫外线辐照DNA是否有保护作用，对不同质量浓度的鸭油进行了DNA保护潜力测定，结果见图6。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/77bf8cccb1778462b871c8a72ab9dadd.jpg&p=816x532&q=30 图 6 不同质量浓度鸭油对DNA的保护作用
Fig. 6 Protection against DNA damage of duck lipids at different concentrations
质粒DNA为环状超螺旋结构，当受到外界环境损伤（如自由基、紫外辐射、强热等）时，环状超螺旋结构受到破坏，可能降解为未知分子质量的碎片。pUC19质粒DNA在琼脂糖凝胶上产生条带的明暗程度表示未被破坏DNA含量的多少，条带越亮表明DNA被破坏的程度越轻，越暗表明DNA被破坏的程度越严重。如图6A所示，泳道11条带明显暗于泳道12，表明DNA经过紫外照射、H2O2处理后其环状结构受到破坏。鸭油+TBHQ组泳道的DNA条带亮度比泳道11亮，比泳道12暗，表明鸭油+TBHQ对DNA有一定的保护作用。如图6B所示，纯鸭油组泳道3～7的DNA条带明显亮于图6A中TBHQ组泳道1～4的，表明鸭油对DNA的保护作用更强一些。为进一步分析鸭油对DNA的保护潜力，分析了各泳道中DNA含量，根据公式（4）计算出各样品对DNA的保护率，结果见图7。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ce5d5f27024102aa221331c9711e4651/d3451d907276b035d705e6e6d8ddd142.jpg&p=612x330&q=30 图 7 各实验组对DNA的保护率
Fig. 7 Protection rates against DNA damage of TBHQ and duck lipids with and without added TBHQ
图7 通过DNA保护率反映各实验组对DNA的保护作用，其值越高，表示样品对DNA的保护作用越好。由实验结果可知，随着纯鸭油、鸭油+TBHQ质量浓度的增加，DNA保护率也在提高，表明纯鸭油、加TBHQ的鸭油对DNA都有明显的保护作用，且二者对DNA的保护作用差异不显著，但均显著高于TBHQ的保护作用，表明纯鸭油、含有TBHQ的鸭油可以降低DNA被氧化的程度。纯鸭油、鸭油+TBHQ的质量浓度在0.2～0.6 mg/mL范围内对DNA保护率差异不显著，但当质量浓度增加后，差异显著，可能是较低质量浓度的鸭油、鸭油+TBHQ对DNA的保护作用较弱。3 讨 论本实验结果表明，较高质量浓度的鸭油可能会促进BSA氧化，使其蛋白质羰基含量增加。目前已有研究表明氧化后的脂质会促进蛋白质氧化，如Li Binbin等的研究表明，氧化脂质可能诱导蛋白质发生更严重的氧化；Park等研究表明，FeCl3/VC/H2O2氧化体系中的H2O2可能会攻击脂质产生烷氧基，从而促进蛋白质氧化；Stadtman等的研究表明脂质氧化过程中形成的过氧自由基可以从蛋白质分子中提取氢原子，导致类似于脂质氧化的自由基介导的链式反应。因此，在本实验中，可能是由于FeCl3/VC/H2O2氧化体系中的H2O2攻击鸭油，导致鸭油氧化后形成自由基，继而攻击BSA，使BSA的蛋白羰基含量增加。由于鸭油的不饱和脂肪酸含量较高，在提取、精炼过程中易被氧化，因此需加入抗氧化剂TBHQ控制其发生氧化。本实验在评价鸭油的抗氧化能力时，同时测定了不同质量浓度鸭油中对应质量浓度TBHQ的抗氧化能力。但是，鸭油的分离提取会经粗提、高温精炼等过程，精炼可使鸭油中的TBHQ质量浓度降低，其抗氧化性可能也会改变，从而导致未经过高温处理的相应质量浓度鸭油中TBHQ抗氧化性结果偏高。即使在TBHQ结果偏高的情况下，除对蛋白的影响外，鸭油抗氧化的各指标均比TBHQ高，且差异显著，表明鸭油本身具有改善生物大分子氧化应激的能力。鸭油的抗氧化性可能与其所含有不饱和脂肪酸有关。本实验室测得实验所用鸭油的不饱和脂肪酸质量分数为（56.33±0.13）%，其中油酸为（30.63±0.58）%，亚油酸为（17.2±0.26）%。油酸、亚油酸对机体有辅助抗氧化作用。Kim和Al-Shudiefat等的研究表明，油酸可降低机体的活性氧水平而增强抗氧化作用。Park等研究了发酵鱼油对UVB诱导的细胞氧化损伤的保护作用，认为是发酵鱼油中的油酸清除活性氧并吸收UVB而具有抗氧化作用。因此，鸭油具有抗氧化活性可能是因其含有较高的不饱和脂肪酸。4 结 论本实验通过测定不同质量浓度鸭油的DPPH自由基清除能力，铁还原能力、抗氧化能力指数、抑制β-胡萝卜素褪色能力、对DNA的保护潜力，对蛋白质羰基的影响，研究了鸭油的体外抗氧化能力，结果表明，鸭油具有一定的体外抗氧化活性，能抵制生物大分子脂质、DNA的氧化应激，且在一定质量浓度范围内，质量浓度越高，抗氧化性越好。1.物业服务企业服务水平低、质量不达标。业主认为物业服务企业管理服务的水平低，服务质量不达标，就会以物业服务企业没有履行相应的义务，以拒交物业费的形式行使自己的抗辩权。业主认为所作出的对抗方式是符合合同法规定的，所以便以采取拖欠物业服务费的方式向物业服务企业进行抗辩。但是笔者认为，业主在对合同抗辩权的理解上有认识误区。 参考文献： 冉茂良, 高环, 尹杰, 等. 氧化应激与DNA损伤. 动物营养学报,2013, 25(10): 2238-2245. 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In Vitro Antioxidant Properties of Duck LipidsLONG Xia1, NING Junli1, HUANG Xianzhi2, DING Xiaowen1,*
(1. Key Laboratory of Processing and Storage of Agricultural Products of Chongqing, National Demonstration Center for Experimental Food Science and Technology Education, College of Food Science, Southwest University, Chongqing 400716, China;2. Science and Technology Department, Southwest University, Chongqing 400715, China)Abstract: Objective: The antioxidant effect of duck lipids against the oxidation of the macromolecules lipid, protein and DNA was evaluated in vitro, with the aim of providing a basis for further study of its antioxidant capacity in vivo. Methods:The antioxidant effect was assessed by 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging capacity, ferric ion reducing antioxidant power (FRAP), oxygen radical absorbance capacity (ORAC), the ability to inhibit β-carotene fading, the effect on the carbonyl content of bovine serum albumin (BSA), and DNA damage protection potential. Results: The halfmaximum inhibitory concentration (IC50) for DPPH radical scavenging was (15.03 ± 0.53) mg/mL; when the concentration of duck lipids was 35 mg/mL, FRAP value was (241.87 ± 3.05) μmol/L, ORAC value was (2.59 ± 0.15) μmol TE/g, and the inhibition rate of β-carotene degradation was (67.29 ± 3.37)%. Duck lipids at lower concentrations could protect BSA,but at 6 mL/g increase the carbonyl content by (50.00 ± 3.21)%. The protection rate against DNA damage of duck lipids at 1 mg/mL was (43.27 ± 0.01)%. Conclusion: Duck lipids had good antioxidant activity.Keywords: duck lipids; antioxidant activity; fatty acid; protein; DNA
收稿日期：2019-01-19第一作者简介：龙霞（1993—）（ORCID: 0000-0001-6357-9230），女，硕士研究生，研究方向为食品安全与功能食品。E-mail: 986474889@qq.com*通信作者简介：丁晓雯（1963—）（ORCID: 0000-0003-1088-6012），女，教授，博士，研究方向为食品安全与保健食品。E-mail: 837731486@qq.comDOI:10.7506/spkx1002-6630-20190119-231中图分类号：TS201.4文献标志码：A文章编号：1002-6630（2020）05-0049-08引文格式：龙霞, 宁俊丽, 黄先智, 等. 鸭油的体外抗氧化活性分析. 食品科学, 2020, 41(5): 49-56. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20190119-231. http://www.spkx.net.cnLONG Xia, NING Junli, HUANG Xianzhi, et al. In vitro antioxidant properties of duck lipids. Food Science, 2020, 41(5):49-56. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20190119-231. http://www.spkx.net.cn
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