搅拌棒吸附萃取结合气相色谱-质谱联用技术分析西湖龙井...
搅拌棒吸附萃取结合气相色谱-质谱联用技术分析西湖龙井茶的挥发性成分搅拌棒吸附萃取结合气相色谱-质谱联用技术分析西湖龙井茶的挥发性成分王梦琪1,2，朱 荫1,*，张 悦1，施 江1，林 智1，吕海鹏1,*（1.农业部茶树生物学与资源利用重点实验室，中国农业科学院茶叶研究所，浙江 杭州 310008；2.中国农业科学院研究生院，北京 100081）摘 要：采用搅拌棒吸附萃取（stir bar sorptive extraction，SBSE）结合气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）联用技术对西湖龙井茶中挥发性香气成分进行提取分析。应用单因素试验结合正交试验对SBSE方法中搅拌棒类型、萃取温度、时间、茶水比、转速、NaCl溶液质量分数等参数进行优化，确定最优萃取条件，建立一种茶叶挥发性香气成分的SBSE-GC-MS分析方法，实验整体准确度（高添加量加标回收率为115.11%，低添加量加标回收率为108.99%）和重复性（相对标准偏差8.23%，n=5）均良好。结果表明，采用PDMS搅拌棒、茶水比60∶1（mg/mL）、NaCl溶液质量分数5%、80 ℃热水冲泡、1 250 r/min磁力搅拌萃取90 min，西湖龙井茶中的挥发性香气成分能得到最大程度的萃取吸附。采用建立的SBSE-GC-MS方法对代表性西湖龙井茶进行分析，共鉴定出173 种化合物，包括烯醇类3 种、烯类11 种、烷烃类37 种、醛类15 种、烯醛类4 种、醚类2 种、醇类17 种、酯类22 种、内酯类5 种、烯酯类9 种、烯酮类5 种、酮类16 种、有机酸类3 种、含硫化合物3 种、氮杂环化合物3 种、氧杂环化合物3 种、芳香烃15 种。结果表明，采用SBSE方法，可使西湖龙井茶中的挥发性香气成分达到较好的萃取效果。关键词：搅拌棒吸附萃取；西湖龙井茶；香气分析；气相色谱-质谱联用香气是评价茶叶品质的重要因子之一。茶香实际上是不同的芳香物质通过不同浓度组合，并对嗅觉神经综合作用所形成的茶叶特有的香型。迄今为止，人们从茶叶挥发性成分中鉴定出的香气物质已多达700余种，主要包括醇类、醛类、酸类、酯类、酚类以及杂环类化合物等。茶叶香气成分的类型复杂，既有来源于茶树品种本身的香气物质，又包括加工过程中化学反应及微生物代谢生成的香气物质，香气物质类型及含量的差异在很大程度上影响着茶叶的风味品质。长期以来，人们开展了大量的茶叶香气成分的分析检测工作，已经取得了较好的研究进展。现实总是困难重重：页岩气井一旦进入“老龄化”，产量递减极为严重。为延缓气井产量递减，涪陵页岩气公司决定实行增压开采，并选定焦页49号平台开展试验，由米瑛负责开采试验的动态分析。 在特征关联图中，特征信息Fi是顶点的集合，Ri表示顶点之间关系的集合，＜fia,fib＞表示fia,fib两个特征信息节点之间存在一条关系弧e，若＜fia,fib＞∈Ri则＜fib,fia＞∈Ri且 fib≠fia，谓词p(fia,fib)定义＜fia,fib＞的意义。 目前，茶叶香气物质的分析一般包括香气成分的富集和香气成分的定性定量分析等。在茶叶香气的富集方面，目前人们广泛采用的方式主要有吹扫捕集（purge &trap，P&T）、固相微萃取（solid phase microextraction，SPME）、减压蒸馏萃取、同时蒸馏萃取（simultaneous distillation extraction，SDE）、顶空蒸汽蒸馏萃取等。近年来，搅拌棒吸附萃取（stir bar sorptive extraction，SBSE）方法逐渐引起人们的关注，SBSE作为一种新型的样品前处理技术，其原理与SPME法类似，都以吸附涂层富集样品中的挥发性成分；但不同的是，SPME技术多采用顶空方式萃取香气物质，而SBSE技术则主要采用浸没方式与样品直接接触吸附香气物质。SBSE的富集倍数取决于被测物质在萃取涂层上的吸附量，由于SBSE搅拌棒上的涂层吸附量是SPME的50～250 倍，因此，其富集倍数较SPME高。聚二甲氧基硅烷（polydimethylsiloxane，PDMS）和聚乙二醇-硅树脂（ethylene glycol-silicone，EG-Silicone）是目前SBSE技术中使用较为普遍的2 种吸附涂层，PDMS主要吸附非极性化合物和极性较弱的化合物，EG-Silicone则主要吸附极性化合物。研究表明，SBSE作为一种环境友好型萃取技术，具有良好的重复性，且能够降低样品分析的检测限；目前，该技术已经广泛应用于水体污染物的检测、果酒、烟草等行业的香气物质检测。因此，可以推断SBSE技术在茶叶香气成分的研究领域可能具有很大的优势和潜力，然而目前尚无系统的相关研究报道。西湖龙井茶作为我国典型的地理标志茶类产品，素以“色翠、香郁、味醇、形美”四绝闻名中外，其香气品质高鲜清幽，清香显著，长期以来备受国内外消费者的喜爱。现有研究已有较多关于西湖龙井茶香气成分的分析报道，采用的香气成分萃取方法种类繁多，主要包括SPME、SDE、P&T等。基于此，本研究拟选用西湖龙井茶为研究对象，采用SBSE方法富集其香气成分，同时结合气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）技术对萃取条件进行优化，分析研究西湖龙井茶的香气成分组成及含量水平等，并与其他萃取方式的研究结果进行比较分析，以期为SBSE方法在茶叶香气分析中的应用提供重要的科学依据。1 材料与方法1.1 材料与试剂西湖龙井茶样品5 个，由杭州龙冠实业有限公司于2018年制作；根据GB/T 18650ü2008《地理标志产品龙井茶》，进行香气感官审评，发现这5 个样品香气品质优异，“清香”显著，具有较好的代表性。从上述5 个茶样中各取5.00 g，均匀混合后磨成茶粉，制成标准混合茶粉。正构烷烃（C3～C7、C8～C40） 北京百灵威公司。1.2 仪器与设备6890-5975 GC-MS联用仪、HP-5ms色谱柱（30 mh250 μm，0.25 μm）（配有GC进样口的热脱附单元和冷进样口） 美国Agilent公司；PDMS及EGSilicone涂层磁力搅拌棒（10 mmh0.5 mm，24 μL）德国Gerstel公司；Advanced Multipoint 6/15多位点磁力搅拌器 美国Thermo Fisher公司；AB104-S电子分析天平瑞士梅特勒-托利多集团。1.3 方法1.3.1 热脱附系统条件溶剂排空模式，初始温度30 ℃，保留1 min，以100 ℃/s速率升温至240 ℃，并在此温度下保持5 min。改良MRS培养基(1 L)：葡萄糖20 g，酵母粉5 g，牛肉膏5 g，胰蛋白胨10 g，蛋白胨5 g，吐温80 1 g，柠檬酸三铵 2 g，磷酸二氢钾2 g，乙酸钠5 g，硫酸镁0.1 g，硫酸锰0.05 g；pH 6.0，121 ℃灭菌20 min。 1.3.2 冷进样系统条件液氮冷却至-100 ℃，升温程序：-100 ℃平衡1 min，以12 ℃/s升温到280 ℃，保持3 min。保留时间3 min。1.3.3 GC-MS测定条件GC条件：HP-5ms色谱柱（30 mh250 μm，0.2 5 μ m）；程序升温：5 0 ℃保持2 m i n，以4 ℃/min的速率升至170 ℃，保持5 min；再以10 ℃/min升至265 ℃，保持5 min。载气（He）流速为1.6 mL/min，溶剂排空模式。MS条件：电子电离源；电子能量70 eV；离子源温度230 ℃；质量扫描范围33～600 u。“寒冬期正是我们的机遇期。2016年西北油田加大内部管理体制机制改革力度时，我厂顺势将采油队改革为作业区，并在作业区内创新实施项目化管理，效果十分明显。”采油一厂采油管理二区经理詹新说。 1.3.4 SBSE优化方法实验采用吸附材料不同的2 种搅拌棒PDMS、EG-Silicone，使用前将搅拌棒置于热脱附进样口中老化45 min。取标准混合的西湖龙井茶粉400 mg，置于20 mL样品瓶中，10 mL沸水冲泡，平衡1 min后放入搅拌棒，置于多位点磁力搅拌器上搅拌吸附60 min，吸附结束后，取出搅拌棒，用超纯水冲洗后再用滤纸吸干水分，后将搅拌棒置于热脱附装置中解吸附，进行GC-MS分析。肺癌是临床中最常见和致命的肿瘤之一，肺癌的发病率和死亡率居恶性肿瘤首位，其中，非小细胞肺癌居多。近年来，手术联合术后放疗和化疗是治疗肺癌的主要方法。然而，由于治疗时间长，肺癌术后并发症多，这将直接影响患者的术后恢复和生活质量。 本研究将2017年2月—2018年6月90例老年非小细胞肺癌患者随机分组，分析了早期护理干预在预防老年非小细胞肺癌患者术后肺部感染及呼吸衰竭中的应用效果，报告如下。 1.3.5 单因素试验在之前的几个月里，S2一直在惴惴不安地奔向它距银河系中心最近的位置。这一过程让我们重新认识了极端环境下的引力行为，也为我们研究银河系大本营中的这个不可见怪兽的性质提供了线索。 采用单因素方法研究搅拌棒类型（PDMS和EGSilicone）、萃取温度（60、70、80、90 ℃和100 ℃）、萃取时间（30、50、70、90 min和110 min）、转速（250、500、750、1 000 r/min和1 250 r/min）、NaCl溶液质量分数（0%～30%）、茶水比（20∶1、40∶1、60∶1、80∶1和100∶1（mg/mL））各因素对SBSE优化结果的影响，试验以化合物总峰面积作为考察指标。设置3 组重复，结果取平均值。1.4 统计学处理 使用SPSS 20.0统计学软件对观察指标进行分析处理，使用χ2检验治疗配对资料中的 RBC、HGb、WBC、MCV、PLT 等指标， 若 P＜0.05则可视差异具有统计学意义。 1.3.6 正交试验优化根据单因素试验结果，选取3 个对SBSE效果影响最大的因素，设置3因素3水平的正交试验L9（33）（表1），确定SBSE的最优萃取条件参数。表1 SBSE正交试验因素与水平Table 1 Coded values and corresponding actual values of SBSE parameters used in orthogonal array designhttp://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/4bc7a9708f54e2f74212bcf42357c56c.jpg&q=30 水平 A转速/（r/min）C茶水比（mg/mL）1 750 0 20∶1 2 1 000 5 40∶1 3 1 250 10 60∶1 B NaCl溶液质量分数/%
1.3.7 定性与定量由于果树的品种不同，因而花芽量同样存在着一定的差异性。果实最终的产量与花芽量明显存在必然的联系。花芽量的数量对于果树的产量具有重要的影响。因此，果树管理人员需要根据果树的花芽及数量情况，对果树的肢长及数量进行适当的调整。在果树发芽期，对于发芽较为旺盛的树枝，只需要保留3-4个左右的花芽即可。开花期，保留有花的枝条，剔除无花的枝条。结果期，结合结果树枝的实际距离进行适当的调整修剪。 分析结果采用NIST 14标准谱库检索结合正构烷烃计算进行香气化合物的定性；采用峰面积归一法，即各个化合物的峰面积与总峰面积间的比值计算，对各个化合物进行相对定量分析。2 结果与分析2.1 各因素对SBSE萃取效率的影响2.1.1 搅拌棒类型对萃取效果的影响研究表明，PDMS作为非极性涂层，具有较好的热稳定性及良好重复性，但对于低亲和力的高极性化合物吸附效果较差；EG-Silicone涂层对于一些极性较高、解吸温度较低的化合物具有遗留效应，导致化合物难以解吸附。本实验为考察西湖龙井茶香气成分分析适用的萃取涂层类型，对以上2 种应用较为广泛的搅拌棒涂层进行比较。称取标准混合茶粉400 mg，按上述方法冲泡后分别用PDMS和EG-Silicone 2 种搅拌棒进行萃取，结果表明，PDMS涂层搅拌棒萃取得到的化合物总峰面积为2.50h108，化合物数量为149；EG-Silicone涂层搅拌棒萃取得到的化合物总峰面积为7.89h107，化合物数量为82，对比发现，PDMS涂层萃取得到的化合物总峰面积有EG涂层的3 倍之多，萃取得到的化合物数量接近EG涂层的2 倍。统计分析结果表明2 种搅拌棒的萃取效率之间存在显著性差异（P＜0.05），因此，PDMS的萃取效果最佳。2.1.2 茶水比对SBSE萃取效果的影响http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/15797e9e4bf23db1cd66205e76027e9e.jpg&p=666x368&q=30 图1 茶水比对SBSE萃取效率的影响
Fig. 1 Effect of tea-to-water ratio on the extraction efficiency of volatile compounds from “XihuLongjing” tea by SBSE
茶汤的浓度关系到茶汤的黏度，进而影响搅拌棒的搅拌运动。分别称取不同质量的标准混合茶粉（200、400、600、800 mg和1 000 mg）进行香气成分的萃取吸附。如图1所示，茶水比为40∶1（mg/mL）条件下，具有最大的总峰面积；统计学分析表明，40∶1与60∶1、80∶1、100∶1之间无显著差异（P＞0.05），但过高的浓度将导致茶汤黏稠度的增加，进而影响搅拌棒的工作效率。因此，茶水比在40∶1（mg/mL）左右时SBSE的萃取效率最佳。2.1.3 萃取时间对SBSE萃取效果的影响http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/284c127f15f7f5f1f41d87f8a95adb21.jpg&p=580x328&q=30 图2 萃取时间对SBSE萃取效率的影响
Fig. 2 Effect of extraction time on the extraction efficiency of volatile compounds from “XihuLongjing” tea by SBSE
搅拌棒吸附萃取过程中，样品萃取时间过短使得挥发性香气成分无法达到顶空、茶汤及吸附相三者之间的平衡，萃取时间过长则会引起香气成分在搅拌棒吸附相上的位点竞争，导致化合物含量不准确。如图2所示，30、50 min与70、90、110 min萃取时间存在显著性差异（P＜0.05），当萃取时间为90 min时茶汤、顶空及吸附相中的香气成分基本达到平衡，萃取效率基本达到最佳，而后随着萃取时间的延长（110 min）并未使总峰面积产生显著提高，因此，90 min的萃取时间为最佳萃取时间。2.1.4 萃取温度对SBSE萃取效率的影响SAP系统技术的引进和发展，成为了企业之间竞争和迈向国际化的重要手段。SAP系统以其卓越的技术设计，极大地满足了现代资源管理发展的需要。我们在应用此技术的同时也要对它的不足改进，完善企业资源管理系统。 http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/020bf726bfc8cbccd4e3c9a42cd842a0.jpg&p=588x318&q=30 图3 萃取温度对SBSE萃取效率的影响
Fig. 3 Effect of extraction temperature on the extraction efficiency of volatile compounds from “XihuLongjing” tea by SBSE
如图3所示，萃取温度60～80 ℃，香气成分的总峰面积有明显的上升趋势，到80 ℃时香气成分总峰面积达到最大；而后，随着温度的继续上升，香气成分的总峰面积则显著下降，统计分析结果表明80 ℃时化合物的总峰面积与60、70、90、100 ℃之间存在显著性差异（P＜0.05），推测过高的温度可能使香气成分大量逸出，同时导致搅拌棒上香气化合物解吸附。因此，80 ℃的萃取温度为最佳萃取温度。2.1.5 搅拌棒转速对SBSE萃取效果的影响将式(16)代入到式(12)-(14)计算出τk、Ti(τk)和φk，周跳的值ΔN则可以由包含周跳的观测量φ′k与经过Chebyshev多项式拟合的数据φk做差后取整得出： 研究表明，前处理过程中的搅拌可以有效提高萃取效率，减少萃取时间。如图4所示，高转速（1 250、1 000 r/min）与低转速（250、500、700 r/min）间存在显著性差异（P＜0.05），但1 250 r/min与1 000 r/min间差异不显著（P＞0.05）；1 000 r/min转速条件下分析得到的化合物具有最大总峰面积，推测1 000 r/min搅拌条件下，最有利于香气成分从水相中的溶解，从而更好地被搅拌棒涂层吸附；因此，考虑到适中的转速又可以避免搅拌棒与样品瓶底机械摩擦过度造成的机械损伤，因此，转速为1 000 r/min左右时最有利于SBSE的香气萃取。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/06951a8b3b71cd4ea8108d7336eff38e.jpg&p=566x324&q=30 图4 转速对SBSE萃取效率的影响
Fig. 4 Effect of agitation rate on the extraction efficiency of volatile compounds from “XihuLongjing” tea by SBSE
2.1.6 NaCl溶液质量分数对SBSE萃取效果的影响http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/54e7b7e7500ea3c866a9129da58db965.jpg&p=570x330&q=30 图5 NaCl溶液质量分数对SBSE萃取效率的影响
Fig. 5 Effect of NaCl concentration on the extraction efficiency of volatile compounds from “XihuLongjing” tea by SBSE
在西湖龙井茶香气化合物萃取过程中加入NaCl可促进香气物质的挥发，主要是由于NaCl产生的盐析作用能够有效降低极性香气成分在水相中的溶解度，促进极性香气成分向气相扩散，从而提高PDMS的萃取效率。如图5所示，当NaCl溶液质量分数为5%、20%与25%时，总峰面积较高，与其他质量分数之间存在显著性差异（P＜0.05）。然而，也有文献报道称，过高的NaCl溶液质量分数增大了溶液黏度，从而导致萃取效率减小。因此，质量分数5%左右的NaCl溶液最有利于SBSE的香气萃取。2.2 SBSE萃取参数的正交试验优化单因素试验分析结果表明，转速、NaCl溶液质量分数及茶水比这三者水平的变化对萃取效率影响变化较大。因此，根据正交试验设计原理，以化合物总峰面积值作为参考指标设计3水平3因素的正交试验，极差及方差分析结果如表2、3所示。表2 SBSE正交试验设计结果
Table 2 Orthogonal array design with experimental resultshttp://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/6afd628e0b33f1bc5da4f2194902f4a3.jpg&q=30 试验号 A转速 B NaCl溶液质量分数C茶水比总峰面积（×108）1 2.60 2 2 3 2 4.76 1 1 1 3 3.95 4 3 3 1 2.24 2 2 1 5 7.99 6 1 2 2 3.47 3 2 3 7 3.36 8 1 3 3 4.26 2 1 3 9 3 1 2 4.38 K1 1.03h109 1.03h109 0.88h109 K2 1.21h109 1.42h109 1.26h109 K3 1.46h109 1.13h109 1.56h109 R 0.43h109 0.38h109 0.68h109
表3 SBSE正交试验方差分析
Table 3 Analysis of variance of the effect of SBSE parameters on the extraction efficiencyhttp://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/28863a1d964738d17a74e71bb3d2ea61.jpg&q=30 方差来源 平方和 自由度 F值 P值A转速 3.104h1016 2 0.470 ＞0.05 B NaCl溶液质量分数 4.861h1016 2 0.736 ＞0.05 C茶水比 7.803h1016 2 1.182 ＞0.05误差 6.601h1016 2
由表3可知，转速、NaCl溶液质量分数及茶水比对SBSE萃取效率的影响均不显著（P＞0.05），而极差分析结果（表2）表明，5号试验组结果具有最大的总峰面积平均值，即组合为A3B2C3时，SBSE方法具有最佳萃取效率。同时，极差分析结果表明3 个因素对SBSE萃取效率的影响为茶水比＞转速＞NaCl溶液质量分数。经过验证，选择A3B2C3为最佳实验组合，即转速1 250 r/min、质量分数5% NaCl溶液以及60∶1（mg/mL）的茶水比。结合单因素分析的优化结果，最终，选定PDMS转子、60∶1（mg/mL）的茶水比、80 ℃萃取温度、90 min萃取时长以及质量分数5% NaCl溶液为本实验中SBSE的最优萃取方法。2.3 方法有效性验证使用优化后的SBSE方法对标准混合茶粉重复5 次萃取，计算化合物总峰面积及5 次重复之间的相对标准偏差（relative standard deviation，RSD），对方法的重复性进行验证；利用西湖龙井茶中含量较高、带有显著清香特征的正己醛计算实验方法的加标回收率，在2 组标准混合茶粉中分别定量加入2 种不同质量浓度的正己醛标准溶液10 μL（84.315 0、42.157 5 μg/mL），而后采用已优化后的SBSE-GC-MS方法对其进行萃取分析，通过软件定性、峰面积计算后，按照加标回收率公式计算，对SBSE实验方法的有效性进行验证。沥青混凝土心墙轴线位于坝轴线上游侧的布置型式可增强下游坝壳对心墙的支撑力、有效减小心墙拉应力［1］；考虑沥青混凝土心墙与坝顶防浪墙连接形成封闭的防渗体系，沥青混凝土心墙轴线宜选择偏向坝轴线上游侧布置。 http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/7085e5051334bda17fc15c4b5bb39e74.jpg
表4 正己醛的加标回收率检测结果
Table 4 Recoveries of n-hexanal in spiked teahttp://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/dfc2264a026fe3a02b63499cc51da315.jpg&q=30 化合物 加入量/μg 回收率/% RSD/%正己醛 0.843 2 115.11 4.73 0.421 6 108.99 8.90
结果表明，5 次样品重复的化合物总峰面积之间的RSD为8.23%。加标回收率测定结果如表4所示，高添加量条件下（0.843 2 μg），该方法对正己醛的回收率为115.11%；低添加量条件下（0.421 6 μg），该方法对正己醛的回收率为108.99%，均在80%～120%之间，且RSD均小于10%（n=3），说明该方法的重复性及准确度良好，适用于西湖龙井茶的香气分析。2.4 西湖龙井茶挥发性香气成分分析表5 西湖龙井茶挥发性香气成分SBSE-GC-MS分析结果
Table 5 Volatile aroma compounds of “XihuLongjing” tea identi fi ed by SBSE-GC-MShttp://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/9138dd5edad44467c41a6e00489f767c.jpg&q=30 编号 保留时间/min化合物名称相对含量/%保留指数鉴定方法1 3.16 2-甲基丁醛 0.36 750 MS/RI 2 3.48 戊醛 1.79 762 MS/RI 3 4.48 甲苯 1.15 800 MS/RI 4 5.08 正己醛 1.58 822 MS/RI 5 5.83 6-氧双环己-2-酮 0.08 MS 6 6.45 二甲基亚砜 0.07 873 MS/RI 7 6.48 顺-3-己烯醇 0.85 875 MS/RI 8 6.56 乙基苯 0.24 879 MS/RI 9 6.79 1,3-二甲基苯 0.73 887 MS/RI 10 7.35 2-庚酮 0.01 907 MS/RI 11 7.66 庚醛 0.68 916 MS/RI 12 8.19 氢化肉桂酸 0.67 933 MS/RI 13 8.55 二甲基砜 0.09 943 MS/RI 14 9.43 (Z)-2-庚烯醛 0.30 969 MS/RI 15 9.62 苯甲醛 1.27 975 MS/RI 16 9.95 正庚醇 0.12 985 MS/RI 17 10.07 3,5,5-三甲基-2-己烯 0.18 988 MS/RI 18 10.25 异丙基苯 0.03 994 MS/RI 19 10.26 1-辛烯-3-醇 0.08 994 MS/RI 20 10.38 2,3-辛二酮 0.03 997 MS/RI 21 10.47 甲基庚烯酮 0.24 1 001 MS/RI 22 10.56 2,2,4,6,6-五甲基庚烷 4.67 1 003 MS/RI 23 10.62 β-月桂烯 0.27 1 004 MS/RI 24 10.74 1,3,5-甲基苯 0.14 1 008 MS/RI 25 10.90 癸烷 0.03 1 013 MS/RI 26 11.02 正辛醛 0.08 1 016 MS/RI 27 11.17 乙酸叶醇酯 0.11 1 020 MS/RI 28 11.33 (E,E)-2,4-庚二烯醛 2.79 1 025 MS/RI 29 11.72 3-甲基-6-(1-甲基乙基)环己烯 0.07 1 035 MS/RI 30 11.90 2,2,4,4-四甲基聚烷 0.39 1 040 MS/RI 31 11.98 柠檬烯 0.47 1 042 MS/RI 32 12.01 1-异丁氧基-2-乙基己烷 0.05 MS 33 12.14 3,7-二甲基十一烷 0.15 MS 34 12.18 2,2,6-三甲基环庚烷 0.23 1 048 MS/RI 35 12.35 3-辛烯-2-酮 0.22 1 053 MS/RI 36 12.39 苯甲醇 0.37 1 054 MS/RI 37 12.55 苯乙醛 2.18 1 058 MS/RI
续表5http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/6f5afb4b1f25b61178d599b5dcf1ef17.jpg&q=30 编号 保留鉴定方法时间/min 化合物名称 相对含量/%保留指数38 12.86 2,6-二甲基辛烷 0.18 1 077 MS/RI 39 13.03 反-2-辛烯醛 0.20 1 072 MS/RI 40 13.10 异佛尔酮 0.15 1 074 MS/RI 41 13.21 2-甲基癸烷 0.16 1 077 MS/RI 42 13.39 苯乙酮 0.38 1 082 MS/RI 43 13.52 (E,E)-3,5-辛二烯-2-酮 0.63 1 086 MS/RI 44 13.57 正辛醇 0.34 1 087 MS/RI 45 13.61 氧化芳樟醇I（顺式，呋喃类） 1.08 1 088 MS/RI 46 14.19 氧化芳樟醇II（反式，呋喃类） 1.42 1 105 MS/RI 47 14.37 (E,Z)-3,5-辛二烯-2-酮 0.95 1 110 MS/RI 48 14.58 十一烷 0.17 1 115 MS/RI 49 14.65 芳樟醇 2.06 1 118 MS/RI 50 14.75 壬醛 0.09 1 121 MS/RI 51 14.81 3,7-二甲基-1,5,7-辛三烯-3-醇 0.14 1 122 MS/RI 52 15.24 苯乙醇 1.30 1 134 MS/RI 53 15.76 3,3,4-三甲基庚烷 0.13 MS 54 16.10 氰化苄 0.29 1 158 MS/RI 55 16.31 (R,S)-5-乙基-6-甲基-3-庚烯-2-酮 0.12 1 165 MS/RI 56 16.80 反-2-壬醛 0.13 1 178 MS/RI 57 16.93 异十二烷 0.02 MS 58 17.01 苯乙酸甲酯 0.04 1 184 MS/RI 59 17.19 3-甲基十一烷 0.03 1 189 MS/RI 60 17.24 芳樟醇氧化物（反式，吡喃类） 1.12 1 191 MS/RI 6117.75萘1.611 205MS/RI 62 17.78 顺-3-己烯基丁酯 0.22 1 206 MS/RI 63 17.79 邻甲基苯乙酮 0.13 1 207 MS/RI 64 18.05 α-松油醇 0.17 1 214 MS/RI 65 18.16 水杨酸甲酯 2.09 1 217 MS/RI 66 18.27 十二烷 1.26 1 221 MS/RI 67 18.33 藏花醛 0.07 1 222 MS/RI 68 18.49 癸醛 0.14 1 227 MS/RI 69 19.09 2,4-壬二烯醛 0.06 1 237 MS/RI 70 19.29 β-环柠檬醛 0.22 1 244 MS/RI 71 19.45 1-苯基-2-丁酮 0.03 1 251 MS/RI 72 19.74 Z-3-甲基丁酸-3-己烯酯 0.16 1 255 MS/RI 73 20.26 异喹啉 0.14 1 264 MS/RI 74 20.38 1,3-二叔丁基苯 0.02 1 279 MS/RI 75 20.69 香叶醇 13.06 1 283 MS/RI 76 20.98 反-9-癸醇 0.20 MS 77 21.15 4-N-丙基苯甲醛 0.19 1 300 MS/RI 78 21.66 2,4,6-三甲基癸烷 0.08 1 305 MS/RI 79 21.76 甲基壬基甲酮 0.05 1 321 MS/RI 80 21.87 2-甲基萘 0.30 1 325 MS/RI 81 21.94 十三烷 0.64 1 328 MS/RI 82 22.03 吲哚 0.38 1 329 MS/RI 83 22.35 4-羟基-3-甲基苯乙酮 0.23 1 342 MS/RI 84 22.71 1-甲基萘 0.20 MS 85 23.10 顺-3-己烯醇甲酸酯 0.23 1 354 MS/RI 86 23.30 亚硫酸十二烷基2-丙酯 0.08 MS 87 23.60 2-甲氧基苯甲酸甲酯 0.04 1 409 MS/RI 88 23.68 4-甲基-5-丙基-壬烷 0.04 MS 89 23.95 (-)-α-荜澄茄油烯 0.03 1 384 MS/RI 90 24.09 1,2,3,4-四氢-1,1,6-三甲基萘 0.86 1 392 MS/RI 91 24.29 丙位壬内酯 0.46 1 396 MS/RI 92 24.49 3-甲基十三烷 0.06 1 403 MS/RI 93 24.62 2-甲基-3-羟基-2,2,4-三甲基戊酯丙酸 0.14 1 409 MS/RI
续表5http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/88b8e6b415fe9cff2f1849daf3719163.jpg&q=30 编号 保留鉴定方法时间/min 化合物名称 相对含量/%保留指数94 18.82 α-蒎烯 0.04 1 414 MS/RI 95 24.67 (Z)-己酸-3-己烯酯 0.43 1 416 MS/RI 96 24.80 3-亚甲基十三烷 0.37 1 420 MS/RI 97 24.84 大麻酸 0.05 1 421 MS/RI 98 25.03 1-十三烯 0.19 1 428 MS/RI 99 25.30 十四烷 1.59 1 436 MS/RI 100 25.36 茉莉酮 1.44 1 440 MS/RI 101 25.61 十二醛 0.10 1 446 MS/RI 102 25.97 2,4,7,9-四甲基-5-癸炔-4,7-二醇 0.14 1 458 MS/RI 103 26.31 α-紫罗兰酮 0.03 1 469 MS/RI 104 26.38 异吡酮 0.12 1 472 MS/RI 105 26.73 香豆素 2.03 1 483 MS/RI 106 26.91 环十四烷 0.59 1 488 MS/RI 107 27.07 香叶基丙酮 0.10 1 494 MS/RI 108 27.33 2,6,10-三甲基十三烷 0.04 1 502 MS/RI 109 27.43 3-乙基十三烷 0.01 1 505 MS/RI 110 28.10 3,7,11-三甲基-1-十二醇 0.40 1 529 MS/RI 111 28.22 反-β-紫罗兰酮 3.11 1 534 MS/RI 112 28.28 3-十三酮 0.14 1 535 MS/RI 113 28.31 十五烯 0.04 1 536 MS/RI 114 28.45 茉莉内酯 0.04 1 542 MS/RI 115 28.56 正十五烷 1.32 1 545 MS/RI 116 28.92 十五醛 0.08 1 557 MS/RI 117 29.07 二丁基羟基甲苯 0.50 1 563 MS/RI 118 29.72 二氢猕猴桃内酯 0.35 1 586 MS/RI 119 29.84 (E)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯醇-3-甲基丁酸酯 0.01 MS 120 30.02 己基环己烷甲酸酯 0.52 1 595 MS/RI 121 30.27 2,3,6-三甲基萘 0.15 1 604 MS/RI 122 30.76 3-甲基-十五烷 0.97 1 621 MS/RI 123 31.43 2-五癸醇 0.10 1 645 MS/RI 124 31.60 酞酸二乙酯 0.49 1 652 MS/RI 125 31.65 1-十六烯 1.44 1 653 MS/RI 126 31.76 5,5-二乙基十三烷 0.24 1 657 MS/RI 127 32.01 雪松醇 0.23 1 666 MS/RI 128 33.08 7-甲基十六烷 0.03 1 702 MS/RI 129 33.19 2,6,10-三甲基-十五烷 0.11 1 706 MS/RI 130 33.28 茉莉酸甲酯 0.30 1 709 MS/RI 131 33.43 环十六烷 0.99 1 712 MS/RI 132 34.19 1-十四醇 0.08 MS 133 34.31 水杨酸己酯 0.21 1 736 MS/RI 134 34.34 乙酸甲酯(3-氧代-2--2-戊烯基]环戊基) 0.04 1 737 MS/RI 135 34.74 (Z)-7-六溴二苯醚 0.03 MS 136 35.23 2,6,10-三甲基十六烷 0.43 MS 137 35.41 2-甲基十六烷 0.07 1 768 MS/RI 138 35.59 2,2’,5,5’-四甲基联苯 0.38 1 723 MS/RI 139 36.27 2-甲基-1-十六醇 0.23 1 792 MS/RI 140 37.20 4-甲基十八烷 0.39 MS 141 38.70 (E)-5-十八烯 0.08 MS 142 39.02 5,5-二甲基十五烷 0.17 1 878 MS/RI 143 39.65 肉豆蔻酸异丙酯 0.03 1 897 MS/RI 144 40.01 新植二烯 1.18 1 915 MS/RI 145 40.16 植酮 0.25 1 922 MS/RI 146 40.43 3,3-二乙基十五烷 0.10 1 937 MS/RI 147 40.78 邻苯二甲酸二异丁酯 2.13 1 955 MS/RI 148 40.88 柳酸苄酯 0.11 1 960 MS/RI 149 40.98 1-十六烷醇 0.47 1 965 MS/RI
续表5http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/72f2c38823f61d9ced0bbe031fcdc3d0.jpg&q=30 编号 保留鉴定方法150 41.02 R,R,R,(E)-3,7,11,15-四甲基-2-十六烯-1-醇乙酸酯 0.24 1 967 MS/RI 151 41.62 1-甲基十二烷基-苯 0.06 1 998 MS/RI 152 41.74 邻苯二甲酸二乙基己酯 0.14 MS 153 41.90 棕榈酸甲酯 0.34 2 016 MS/RI 154 42.27 3,5-二叔丁基-4-羟基苯丙酸甲酯 0.02 2 041 MS/RI 155 42.62 邻苯二甲酸二丁酯 1.23 2 065 MS/RI 156 42.99 十二烷基二乙二醇醚 0.04 MS 157 43.10 软脂酸乙酯 0.04 2 097 MS/RI 158 43.18 正二十一烷 0.11 2 105 MS/RI 159 44.43 油酸 0.07 2 156 MS/RI 160 44.46 硬脂醇 0.27 2 157 MS/RI 161 44.60 亚油酸甲酯 0.05 2 163 MS/RI 162 44.69 顺-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯 0.07 2 167 MS/RI 163 44.89 叶绿醇 1.78 2 178 MS/RI 164 45.41 11-亚甲基三环十二烷 0.02 2 199 MS/RI 165 45.58 对甲氧基肉桂酸异辛酯 0.06 2 217 MS/RI 166 45.99 苯甲酸二十烷基酯 0.07 MS 167 46.01 乙酸正十七烷基酯 0.10 2 266 MS/RI 168 47.39 对甲氧基肉桂酸辛酯 0.05 2 511 MS/RI 169 47.76 4,8,12,16-四甲基十七烷-4-内酯 0.26 2 546 MS/RI 170 48.31 1-二十二烷醇乙酸酯 0.02 MS 171 49.50 正二十六烷 0.02 2 694 MS/RI 172 49.57 1,2,3-丙三醇脂十八碳烯酸异酯 0.18 2 700 MS/RI 173 51.03 正二十七烷 0.21 2 798 MS/RI时间/min 化合物名称 相对含量/%保留指数
通过谱库检索并结合正构烷烃，对最优组合茶样进行分析，由表5可知，共定性出173 种共有香气成分，其中，相对含量较高的化合物有正己醛、苯甲醛、2,2,4,6,6-五甲基庚烷、(E,E)-2,4-庚二烯醛、苯乙醛、芳樟醇及其氧化物、香叶醇、吲哚、反-β-紫罗兰酮等。http://rtt.5read.com/pdgpath/format?f=ba5bc3a84dc004baa2c1abd2ff3e7c4f/c330cd0c1dba59a258da7e9e2c8d0689.jpg&p=620x438&q=30 图6 西湖龙井茶中挥发性香气化合物种类及其相对含量
Fig. 6 Kinds and relative contents of volatile aroma compounds in“XihuLongjing” tea
根据香气成分化学结构的差异，对检测得到的西湖龙井茶中挥发性香气成分进行分类，各类别化合物的数量和相对含量如图6所示。可见，通过SBSE-GC-MS分析得到的西湖龙井茶香气化合物主要包含烯醇类3 种（1.80%）、烯类11 种（3.99%）、烷烃类37 种（16.07%）、醛类15 种（8.96%）、烯醛类4 种（3.34%）、醚类2 种（0.07%）、醇类17 种（21.85%）、酯类22 种（8.65%）、内酯类5种（3.14%）、烯酯类9 种（1.57%）、烯酮类5 种（2.15%）、酮类16 种（6.36%）、有机酸类3 种（0.86%）、含硫化合物3 种（0.24%）、氮杂环化合物3 种（0.52%）、氧杂环化合物3 种（3.61%）、芳香烃15 种（6.66%）。烷烃、酯类及醇类化合物是西湖龙井茶中化合物种类最多的成分，相对含量较高的烷烃类物质有2,2,4,6,6-五甲基庚烷、十四烷。十四烷带有微弱蜡烛气味，对绿茶的香气类型具有关键作用；水杨酸甲酯（冬青油气味）、邻苯二甲酸二异丁酯（微具芳香气味）是相对含量较高的酯类物质，它们也是西湖龙井中含量较高的化合物；芳樟醇和香叶醇是含量较高的醇类物质，SBSE-GC-MS方法检测到的西湖龙井茶样品中芳樟醇的相对含量为2.06%，而香叶醇的相对含量则达到了13.60%。芳樟醇是茶叶中重要的香气物质之一，具有木香、花香特征；香叶醇具有玫瑰花香、蔷薇香，也是西湖龙井茶中的典型香气成分。有研究表明，香叶醇与芳樟醇、壬醛、癸醛、β-环柠檬醛等成分一起，对构成绿茶的特征风味同样具有重要作用。采取SPSS 26.0统计学软件进行数据分析，其中计数资料以表示；计量资料应用（±s）表示，分别行χ2检验和t检验，P<0.05为差异有统计学意义。 对比近年来有关西湖龙井茶香气萃取方法的研究报道，可以发现不同香气萃取方法分析得到的西湖龙井香气成分之间也存在较大差异。例如，汪厚银等采用了微阱捕集法（动态顶空）萃取方法结合GC-MS对西湖龙井茶进行了香气成分分析，共检测出了43 种香气成分，主要香气成分中烯烃类14 种、醇类9 种、酮类6 种、醛类4 种、杂环类4 种以及硫化物2 种；孙彦等对6 种龙井茶进行SDE-GC-MS分析，共分离出100 个峰，鉴定得到了62 种香气成分，并发现西湖产区的龙井茶香气总量占绝对优势；代毅等采用SPME结合GC-MS技术从西湖龙井茶种鉴定出26 个组分，同时发现己酸-反-2-己烯酯是其西湖龙井样品中含量最高的成分；此外，肖作兵等采用HS-SDE提取西湖龙井茶的香气成分，该研究共鉴定出75 种香气成分，包括醇类24 种、醛类8 种、酮类10 种、酯类6 种、杂环类16 种及其他类11 种。分析近年有关西湖龙井茶的香气研究报道存在差异的原因，与不同的萃取方法有直接的关系，这些方法均具有各自优点，也都存在萃取效果及实验操作上的不足。例如，吹扫捕集方法不需要有机试剂，同时污染小，操作简单，但其主要针对低沸点挥发性组分的富集；减压蒸馏萃取法方法可以较好还原茶汤的香气，但回收率较低；SPME同样具有分析样品用量少，方法简单、快速、费用低等优点，且SPME的萃取涂层种类丰富，选择性较高，在肉类以及乳制品风味研究中应用广泛；但由于SPME萃取头吸附相体积的限制，SPME吸附的挥发性香气成分总量对比SBSE仍较少；SDE方法虽操作简单，仅需少量样品，但提取过程中的高温环境易导致茶叶香气物质发生氧化、降解等化学反应，继而造成了茶香与实际不符。SBSE技术与常见的其他茶叶香气萃取技术相比，具有不使用有机溶剂、所需样品量少（本实验中仅需600 mg）、萃取量大、简单易操作、茶叶香气成分还原度高、回收率及重复性较好等特点，因此在西湖龙井茶香气成分萃取上具有一定的优势。但值得注意的是，从西湖龙井香气成分分析结果看，SBSE方法目前仍存在一些技术缺陷：首先，SBSE方法可以大量萃取到茶汤中的挥发性组分，但由于挥发性香气成分的沸点存在差异，因此存在一部分低沸点挥发性香气成分萃取初期大量逸出茶汤，无法较好地被搅拌棒吸附；其次，本实验使用的搅拌棒萃取涂层为单一PDMS，该涂层针对非极性及极性较弱的非挥发性成分富集能力较强，然而该涂层无法较好地富集极性成分；最后，由于本实验中搅拌棒处于浸没于茶汤中状态，这使得茶汤当中一部分极性较小的非挥发性成分也在一定程度上被萃取涂层吸附，因此本实验条件下的香气分析结果相对于纯挥发性成分较为复杂，后期数据处理时需要更进一步对分析组分进行判别鉴定；鉴于此，在后续研究中考虑改进SBSE萃取方法，如同时使用PDMS及EG-Silicone 2 种搅拌棒进行香气成分萃取，从而使富集成分极性范围更广；采用SBSE结合吹扫捕集方法，从而实现对顶空及茶汤中香气成分的同时萃取；SBSE搅拌棒顶空处理实现对茶汤上方挥发性成分的富集等。此外，对比GC-MS技术，全二维气相色谱-飞行时间质谱技术其分析方法的灵敏度更高、峰容量更大、检测得到的成分更多，因此，本实验在后续的西湖龙井香气研究中，将尽可能把SBSE方法与全二维气相色谱-飞行时间质谱结合，并综合气相色谱在线嗅闻技术与香气活度值分析方法，对西湖龙井茶的香气成分进行系统全面的分析研究。3 结 论本实验采用SBSE前处理方法萃取西湖龙井茶的香气成分，并结合GC-MS进行香气分析；通过优化搅拌棒类型、茶水比、萃取时间、萃取温度、搅拌棒转速、NaCl溶液质量分数等萃取参数，确定了适用于西湖龙井茶的SBSE最优萃取条件：PDMS涂层搅拌棒，600 mg茶粉，10 mL 80 ℃热水冲泡，质量分数5% NaCl溶液，1 250 r/min条件下搅拌萃取90 min，而后进行GC-MS分析。经SBSE-GC-MS分析，从西湖龙井茶中检测出17 类共173 种挥发性成分，主要包括37 种烷烃类、22 种酯类、17 种醇类、16 种酮类、15 种芳香烃、15 种醛类、11 种烯类、9 种烯酯类、5 种内酯类化合物、烯酮类5种、烯醛类4 种、3 种烯醇类、3 种氧杂环类、3 种氮杂环类、3 种含硫化合物、3 种有机酸类化合物以及2 种醚类化合物；正己醛、苯甲醛、2,2,4,6,6-五甲基庚烷、(E,E)-2,4-庚二烯醛、苯乙醛、芳樟醇及其氧化物、香叶醇、吲哚、反-β-紫罗兰酮具有较高的相对含量；对比其他香气萃取方法，SBSE具有萃取量大、操作更简易、茶叶香气成分还原度高、回收率及重复性较好等特点，在西湖龙井茶香气成分萃取上具有明显的优势，有望成为今后茶叶挥发性成分分析的重要研究方法之一。参考文献： 宛晓春. 茶叶生物化学. 北京: 中国农业出版社, 2003. 王秋霜, 陈栋, 许勇泉, 等. 中国名优红茶香气成分的比较研究.中国食品学报, 2013, 13(1): 195-200. 李拥军. 柱吸附法和SDE法提取茶叶香气的研究. 湖南农业大学学报(自然科学版), 2001, 27(4): 295-299. 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Analysis of Volatile Compounds in “XihuLongjing” Tea by Stir Bar Sorptive Extraction Combine with Gas Chromatography-Mass SpectrometryWANG Mengqi1,2, ZHU Yin1,*, ZHANG Yue1, SHI Jiang1, LIN Zhi1, LÜ Haipeng1,*
(1. Key Laboratoryof Tea Biology and Resources Utilization, Ministry of Agriculture,Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China;2. Graduate School of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China)Abstract: In this study, stir bar sorptive extraction (SBSE) combined with gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS)was used to analyze the volatile compounds of “XihuLongjing” tea. SBSE parameters including stir bar type, extraction temperature, extraction time, tea-to-water ratio, agitation rate and ionic strength were optimized by one-factor-at-a-time and orthogonal array design methods in order to establish the SBSE-GC-MS method. The overall accuracy of the experiment was satisfactory (recoveries of 115.11% and 108.99% at high and low spiked concentration levels, respectively) and the relative standard deviation (RSD) for repeatability was 8.23% (n = 5). The results showed that the volatile aroma compounds could be extracted and adsorbed to the greatest extent under the following conditions: using polydimethyl siloxane (PDMS) twister as an extraction medium, tea-to-water ratio 60:1 (mg/mL), NaCl concentration 5%, hot water temperature 80 ℃, extraction time 90 min, and agitation rate 1 250 r/min. When representative “XihuLongjing” tea samples were analyzed by the SBSE-GC-MS method, a total of 173 volatile compounds were identified, including 3 enols, 11 alkenes, 37 alkanes, 15 aldehydes,4 olefine aldehydes, 2 ethers, 17 alcohols, 22 esters, 5 lactones, 9 allyl esters, 5 ketones, 16 ketones, 3 organic acids, 3 sulphur compounds, and 3 nitrogen heterocyclic compounds, 3 oxygen heterocyclic compounds, and 15 aromatic hydrocarbons.Eventually, we concluded that the volatile aroma compounds in “XihuLongjing” tea could be extracted well by SBSE.Keywords: stir bar sorptive extraction; “XihuLongjing” tea; aroma analysis; gas chromatography-mass spectrometry
收稿日期：2019-03-25基金项目：国家自然科学基金面上项目（31470694）；现代农业产业技术体系建设专项（CARS-19）；中国农业科学院创新工程项目（CAAS-ASTIP-2014-TRICAAS）第一作者简介：王梦琪（1995ü）（ORCID: 0000-0003-2243-6967），女，硕士研究生，研究方向为茶叶加工品质化学。E-mail: lfwangmengqife@126.com*通信作者简介：朱荫（1989ü）（ORCID: 0000-0002-1061-5100），女，副研究员，博士，研究方向为茶叶加工品质化学。E-mail: zhuy_scu@tricaas.com吕海鹏（1980ü）（ORCID: 0000-0002-4644-4323），男，研究员，博士，研究方向为茶叶加工品质化学。E-mail: lvhaipeng@tricas.comDOI:10.7506/spkx1002-6630-20190325-322中图分类号：S571.1文献标志码：A文章编号：1002-6630（2020）04-0140-09引文格式：王梦琪, 朱荫, 张悦, 等. 搅拌棒吸附萃取结合气相色谱-质谱联用技术分析西湖龙井茶的挥发性成分. 食品科学,2020, 41(4): 140-148. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20190325-322. http://www.spkx.net.cnWANG Mengqi, ZHU Yin, ZHANG Yue, et al. Analysis of volatile compounds in “XihuLongjing” tea by stir bar sorptive extraction combine with gas chromatography-mass spectrometry. Food Science, 2020, 41(4): 140-148. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20190325-322. http://www.spkx.net.cn
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